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基于AFM技术的桑黄多糖体外抗氧化作用研究

摘要氧化损伤能够引起机体氧化应激反应,会引起机体衰老、黑色素沉降、皮肤癌、炎症等多种疾病。桑黄是一种药食同源的真菌,文献报道桑黄多糖有清除DPPH自由基的作用。因此,本论文拟通过细胞模型,研究基于AFM(AtomicForceMicroscopy,原子力显微镜)技术对桑黄多糖的体外抗氧化作用进行研究。AFM能够在纳米级检测细胞的力学特性,如细胞高度、粗糙度、粘附力、杨氏模量等,通过对细胞物理学机械性能的表征,研究桑黄多糖抑制细胞氧化损伤的作用。<br>  本文基于AFM技术对桑黄多糖的体外抗氧化作用进行研究,主要工作内容如下:<br>  1)以水提法提取桑黄多糖,通过对提取时间、温度和料液比三个桑黄多糖提取相关的因素,采取响应面法对桑黄多糖的提取工艺进行优化,筛选出最优提取方法,最佳的桑黄多糖提取的条件为提取时间2h,料液比1:30,提取温度70℃。<br>  2)桑黄多糖的抗氧化活性初步检测。通过DPPH自由基清除实验对所提取的桑黄多糖进行初步抗氧化活性测定。以HaCaT细胞(人永生化角质形成细胞)为研究对象,建立乙醇氧化损伤模型;研究不同浓度桑黄多糖分别作用不同时间的HaCaT细胞的抗氧化活性,筛选出合适实验浓度(低浓度:7.5μg/mL,高浓度:15μg/mL)用于进一步研究桑黄多糖对HaCaT细胞力学特性的影响。<br>  3)通过DPPH自由基清除实验和以HaCaT细胞为研究对象对桑黄多糖抗氧化活性初步检测的实验基础上,通过AFM、SEM和荧光染色法对HaCaT细胞氧化损伤前后的力学特性、形貌以及细胞骨架进行成像分析,以此来研究桑黄多糖对HaCaT细胞的氧化损伤的抑制作用。实验结果表明,通过对单细胞力学参数(细胞高度、杨氏模量、粘附力、表面粗糙度)的检测与分析,高浓度和低浓度的桑黄多糖有不同程度的维持细胞的机械性能的作用,具有明显抑制乙醇对HaCaT细胞的氧化损伤。并且随着桑黄多糖的作用时间增加,乙醇氧化损伤的细胞的力学参数逐渐接近对照组的HaCaT细胞。SEM和荧光染色的实验结果整体与AFM研究结果一致,说明细胞的力学参数可以作为判断细胞活性的一个指标。<br>  本文基于AFM技术对桑黄多糖的抗氧化活性进行研究,以期为桑黄的开发应用提供研究基础,尤其是应用于护肤品等领域。

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