摘要SARS-CoV-2疫情的流行给世界人们的身心健康和生活工作都带来了极大的影响。SARS-CoV-2的高效检出和防治是临床医学和生命科学研究的热点。核衣壳蛋白N蛋白具有在SARS-CoV-2病毒感染的过程中含量丰富,序列保守,突变少的优点,相较于SARS-CoV-2其他结构蛋白是优秀的新型冠状病毒早期检测靶点。本文拟针对SARS-CoV-2N蛋白建立多种检测方法,以期为SARS-CoV-2的临床快速检测提供适应不同实际检测场景的多种检测方法。<br> 本课题针对SARS-CoV-2的N蛋白分别建立了免疫学方法:酶联免疫吸附方法以及磁性微球化学发光免疫检测方法,和分子生物学检测方法:RT-qPCR检测方法以及RT-LAMP等温扩增检测方法,对四种方法分别进行了反应体系的构建和实验条件的优化,并对建立的四种检测方法进行了特异性、灵敏性以及重复性等的评估。<br> 实验结果表明,本研究所建立SARS-CoV-2的ELISA检测方法线性回归方程:Y=0.2323X+0.1532,R2为0.9967。特异性、重复性良好,常见病原菌不会造成假阳性,最低检出浓度可达400pg/mL;磁性微球化学发光免疫检测方法线性回归方程为:Y=61.45X+10714,R2为0.9925。特异性、重复性良好,最低检出浓度可达200pg/mL;平均回收率在97.44%-103.35%之间,准确性较好;建立了RT-qPCR检测方法的标准曲线,其中内参基因RPP30的线性回归方程为:Y=-3.111X+40.11,相关系数R2为0.9967;N基因线性回归方程为Y=-3.302X+41.53,相关系数为0.9956。该检测方法可以检出的最低样本浓度为24copies/mL,灵敏度(定量限)为47copies/mL;特异性、重复性良好;建立的RT-LAMP检测方法于65℃反应30min即可出结果,灵敏度可达25copies,并使用pH法、染料法、探针法使检测结果可视,三种方法的同样本检测结果一致,特异性、重复性良好。<br> 本文的研究为SARS-CoV-2和未来可能出现的其他致病物质检测方法的建立提供了思路、经验和方法。
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