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PLCD1通过下调CDKs诱导周期阻滞和DNA损伤抑制软骨肉瘤生长的分子机制研究

摘要目的:软骨肉瘤是一种发生于间充质细胞或软骨基质的恶性肿瘤,临床对于高级别软骨肉瘤的整体治疗效果仍较差,亟需阐明软骨肉瘤的发病机制,寻找新的分子标志物。我们的研究旨在探究PLCD1在软骨肉瘤中的具体作用,为软骨肉瘤的药物治疗提供依据。<br>  方法:应用免疫组化和Western Blot检测软骨肉瘤组织样本中 PLCD1 表达情况,并进一步利用 TCGA 数据库分析了泛癌种中PLCD1的表达情况。细胞水平上,我们在软骨肉瘤细胞系中构建PLCD1敲低和过表达的稳转细胞株。使用集落形成实验和CCK-8细胞增殖实验检测敲减和过表达PLCD1对于软骨肉瘤细胞株的细胞增殖能力的影响;利用流式细胞仪检测敲减和过表达PLCD1对于软骨肉瘤细胞株细胞周期和凋亡的影响。动物实验中,我们利用了野生型及PLCD1过表达的软骨肉瘤细胞系进行了裸鼠皮下成瘤实验,体内水平研究PLCD1对于高级别软骨肉瘤增殖的影响。分子机制上,我们检测PLCD1敲低和过表达的稳转细胞株中CDKs及相关细胞周期蛋白的表达情况,并利用caspase抑制剂Q-VD-Oph研究了PLCD1对于软骨肉瘤细胞株细胞凋亡的影响的分子机制。<br>  结果:免疫组化和Western Blot检测结果表明,相较于低级别软骨肉瘤而言,高级别软骨肉瘤组织中 PLCD1 表达较低,结果表明 PLCD1 表达水平与软骨肉瘤恶性程度之间存在一定的关系。TCGA数据库数据分析显示,在多种肿瘤类型中,相较于正常对照,肿瘤组织中PLCD1表达较低,这些结果提示肿瘤组织中PLCD1或将表现为抑癌基因。在高级别软骨肉瘤细胞系中敲低 PLCD1可以显著促进软骨肉瘤细胞的增殖,加速其细胞周期,抑制肿瘤细胞的凋亡。相应的,在软骨肉瘤细胞系中过表达PLCD1可以显著抑制软骨肉瘤细胞的增殖,阻滞其细胞周期,促进肿瘤细胞的凋亡。机制上,PLCD1 过表达抑制 CDK/细胞周期蛋白并诱导肿瘤细胞 DNA 损伤,继而导致细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生。动物实验中,过表达 PLCD1可以显著抑制软骨肉瘤的生长,这一结果也验证了细胞层面上, PLCD1 抗肿瘤作用。<br>  结论: 高级别软骨肉瘤中PLCD1表达较低。在体外和体内实验中,过表达PLCD1可以诱导DNA损伤继而导致细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生。PLCD1是高级别软骨肉瘤进一步研究的新靶点。

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