摘要目的<br> 随着睡眠障碍逐渐低龄化和普遍化,睡眠不足渐渐成为人们值得关注的问题。由于现代医学的抗失眠药物存在明显的依赖性及不良反应,人们更趋向于寻求传统医学解决问题。交泰丸(Jiao-Tai-Wan,JTW)在临床上被广泛用于治疗各种原因引起的心肾不交型失眠,效果甚佳,不良反应少,患者依从性高。但交泰丸抗失眠的机制仍然不确定。因此,本研究中通过采用小鼠失眠模型来探讨交泰丸对小鼠失眠的改善作用及其相关分子靶点,为交泰丸治疗睡眠障碍提供理论支撑。方法<br> 将36只6周SPF级C57BL/6J雄性健康小鼠随机分为空白组、模型组、低剂量交泰丸组、中剂量交泰丸组、高剂量交泰丸组、唑吡坦组,每组6只。模型组和所有治疗组均采用腹腔注射对氯苯丙氨酸1天(4-Chloro-DL-phenylalanine,PCPA)结合触碰法睡眠剥夺7天(10:00-13:00)制备小鼠失眠模型,空白组第一天采用腹腔注射生理盐水处理且不进行睡眠剥夺。所有小鼠于实验第一天开始给药。低剂量交泰丸组、中剂量交泰丸组、高剂量交泰丸组分别采用1.65mg/kg、3.3mg/kg、6.6mg/kg浓度的交泰丸水煎剂进行灌胃,唑吡坦组采用3.3mg/kg的唑吡坦水溶剂进行灌胃,空白组和模型组则灌服生理盐水,20-25g小鼠体重平均灌胃0.3ml,以0.15ml/10g小鼠体重计算,连续给药7天。第7天给药结束后对小鼠进行旷场实验(OpenFieldTest,OFT)、新颖物体识别实验(NovelObjectRecognition,NOR)和水迷宫实验(MarrisWaterMaze,MWM),随后处死老鼠,取下丘脑、脑干、海马及前额皮质脑区,采用ELISA方法、Westernbolt方法、Real-timePCR法检测cAMP浓度,检测PKA、ERK、p-ERK、BDNF、Homer1的蛋白和Homer1amRNA表达,使用PKA抑制剂H-89来确定PDE4D信号通路的特异性。<br> 结果<br> 旷场实验结果显示睡眠剥夺后小鼠减少了自主行动和探索行为,给予交泰丸治疗的小鼠移动总距离和站立次数增加;新颖物体识别实验结果显示失眠模型小鼠不能明确分辨新旧物体,交泰丸治疗后小鼠的辨别指数上升;水迷宫实验结果表明当小鼠处于失眠时,其定位学习和空间探索的能力下降,交泰丸治疗后,小鼠逃逸期缩短,穿过平台次数和停留平台实际时间均增加。Westernbolt结果显示,交泰丸在一定程度上下调了小鼠脑内四个脑区(下丘脑、脑干、前额皮质、海马)的PDE4D,提高了cAMP、PKA、BDNF蛋白表达水平,阻断了ERK1/2磷酸化激活,调节Homer1和Homer1a的表达水平。PKA抑制剂H-89则逆转了交泰丸的改善作用。<br> 结论<br> PCPA腹腔注射结合触碰法睡眠剥夺的失眠模型显著减弱了小鼠的自主活动、探索行为、认知能力、空间探索能力、记忆能力和定点学习能力,由此可知该失眠模型的合理和科学性;给予交泰丸治疗后可不同程度地改善失眠引起的行为学改变,其可能通过PDE4D介导的cAMP/PKA/BDNF/ERK1/2信号通路调控Homer1a水平来改善由PCPA腹腔注射结合触摸法睡眠剥夺引起的失眠,改善小鼠自主活动功能和认知障碍,提高学习和记忆能力。
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