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摘要【目的】<br>　　Fyn在几种类型的肿瘤中发挥促癌作用，然而其在淋巴瘤中的作用尚未清晰。本研究旨在了解Fyn对人B淋巴母细胞及伯基特淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响，并初步探究其影响伯基特淋巴瘤细胞的分子机制，为伯基特淋巴瘤的分子机制研究提供理论依据。<br>　　【方法】<br>　　1.采用Westernblot方法检测Fyn蛋白在不同淋巴瘤细胞株以及人B淋巴母细胞中的表达情况。<br>　　2.采用Fyn过表达慢病毒转染Daudi和HMy2.CIR细胞，构建Daudi和HMy2.CIR过表达的稳定细胞株，采用定量PCR及Westernblot方法检测Fyn的过表达效率。通过细胞增殖实验（CCK-8法及软琼脂克隆形成实验），细胞凋亡实验（AnnexinV-PE/7-AAD双染法）和Westernblot法检测细胞凋亡相关蛋白，验证Fyn过表达对Daudi和HMy2.CIR细胞增殖和凋亡的影响。<br>　　3.采用Fyn敲低慢病毒转染Raji和HMy2.CIR细胞，构建Raji和HMy2.CIR低表达的稳定细胞株，采用定量PCR及Westernblot方法检测Fyn的敲低效率。通过细胞增殖实验（CCK-8法及软琼脂克隆形成实验），细胞凋亡实验（AnnexinV-PE/7-AAD双染法）和Westernblot法检测细胞凋亡相关蛋白，验证Fyn低表达对Raji和HMy2.CIR细胞增殖和凋亡的影响。<br>　　4.通过Westernblot法检测Fyn过表达的Daudi细胞以及Fyn低表达的Raji细胞与其对应的空载体对照组细胞PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白（Akt，p-Akt，mTOR，p-mTOR）的蛋白水平，验证Fyn低表达或过表达对Daudi和Raji细胞PI3K/Akt/mTOR通路的影响。<br>　　【结果】<br>　　1.Fyn蛋白在Daudi和DB细胞中的表达低于HMy2.CIR细胞，Fyn蛋白在Raji细胞中的表达高于HMy2.CIR细胞，差异具有统计学意义。<br>　　2.成功构建过表达Fyn的Daudi和HMy2.CIR稳定细胞株，采用定量PCR及Westernblot方法验证，结果显示FynmRNA和蛋白的表达水平均明显上升，差异均具有统计学意义。<br>　　3.Fyn过表达可促进Daudi和HMy2.CIR细胞的增殖、抑制Daudi和HMy2.CIR细胞的凋亡。<br>　　CCK-8增殖实验结果显示：Daudi细胞的Fyn过表达组（Daudi-Fyn-OE）和空载体对照组（Daudi-Vector）相比，在24h后的增殖能力增强，差异具有统计学意义；HMy2.CIR细胞的过表达组（HMy2.CIR-Fyn-OE）和空载体对照组（HMy2.CIR-Vector）相比，在48h后的增殖能力增强，差异具有统计学意义。软琼脂克隆形成实验结果显示：Daudi-Fyn-OE组及HMy2.CIR-Fyn-OE组的克隆形成能力远高于其对应空载体对照组，差异均具有统计学意义。AnnexinV-PE/7-AAD流式细胞仪结果显示：在Daudi及HMy2.CIR细胞中，Fyn过表达组与对应空载体对照组相比，凋亡比率明显降低，且差异均具有统计学意义。Westernblot结果显示：在Daudi及HMy2.CIR细胞中，Fyn过表达组与对应对照组相比，抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显上调，而促凋亡蛋白Bax表达明显下调，差异均具有统计学意义。<br>　　4.成功构建稳定低表达Fyn的Raji和HMy2.CIR细胞株，采用定量PCR及Westernblot方法验证，结果显示FynmRNA和蛋白的表达水平均明显下降，差异均具有统计学意义。<br>　　5.Fyn低表达可抑制Raji和HMy2.CIR细胞的增殖、促进Raji和HMy2.CIR细胞的凋亡。<br>　　CCK-8增殖实验结果显示：HMy2.CIR-Fyn-sh1、HMy2.CIR-Fyn-sh3组与HMy2.CIR-shNC组相比，在48h后的增殖能力下降，差异均具有统计学意义；Raji-Fyn-sh1、Raji-Fyn-sh3组与Raji-shNC组相比，在24h后的增殖能力下降，差异均具有统计学意义。软琼脂克隆形成实验结果显示：HMy2.CIR-Fyn-sh1、HMy2.CIR-Fyn-sh3组及Raji-Fyn-sh1、Raji-Fyn-sh3组的克隆形成能力远低于其对应空载体对照组，差异均具有统计学意义。AnnexinV-PE/7-AAD流式细胞仪结果显示：在HMy2.CIR及Raji细胞中，Fyn低表达组与对应对照组相比，凋亡比率明显增高，且差异均具有统计学意义。Westernblot结果显示：在HMy2.CIR及Raji细胞中，Fyn低表达组与对应对照组相比，抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显下调，而促凋亡蛋白Bax表达明显上调，差异均具有统计学意义。<br>　　6.Westernblot方法检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达，结果显示：对比Daudi-Fyn-OE与Daudi-Vector组，p-AKT、p-mTOR蛋白明显上调，差异均具有统计学意义。对比Raji-Fyn-sh1、Raji-Fyn-sh3组与Raji-shNC组，p-AKT、p-mTOR蛋白明显下调，差异均具有统计学意义。<br>　　【结论】<br>　　1.Fyn可以促进伯基特淋巴瘤细胞及人B淋巴母细胞增殖并抑制细胞凋亡。<br>　　2.Fyn可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路影响伯基特淋巴瘤细胞的增殖。