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摘要[目的]:研究AKR1C3（醛酮还原酶家族1成员C3，Aldo-ketoreductasefamily1memberC3）对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响，并初步探究AKR1C3与CBR1（羰基还原酶1，carbonylreductase1）之间的调控关系，为肝癌的治疗提供新思路。<br>　　[方法]:<br>　　1.在TIMER2.0数据库中分析多种肿瘤中AKR1C3的表达情况。在GEPIA数据库、TCGA数据库跟GSE数据库分析AKR1C3在肝癌组织中的表达情况。随后在TCGA数据库中进行AKR1C3在肝癌中的K-M生存分析，并下载了肝癌样本的临床随访信息资料，进行了AKR1C3表达与肝癌患者的临床病理特征相关性分析以及Cox回归分析。<br>　　2.免疫组化比较肝癌组织与癌旁组织中AKR1C3的表达差异，分析AKR1C3表达与临床病理资料跟预后的相关性分析。<br>　　3.Westernblot检测AKR1C3在正常肝细胞LO2、LX-2（肝星形细胞）和两株肝癌细胞株（HepG2、Huh6）中的表达情况。<br>　　4.构建稳定低表达AKR1C3的HepG2细胞株，荧光显微镜下观察转染效率，Westernblot验证转染的效果。<br>　　5.CCK8实验、Transwell迁移和侵袭实验观察了敲低AKR1C3对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。<br>　　6.String数据库（https://cn.string-db.org/）预测可能与AKR1C3相互作用的蛋白，TCGA数据库中进行了两者表达的相关性分析，Co-IP实验验证了AKR1C3与CBR1相互作用。<br>　　7.Westernblot检测CBR1在正常肝细胞LO2、LX-2（肝星形细胞）和三株肝癌细胞株（HepG2、Huh6、Huh7）中的表达情况；在TCGA数据库跟GSE数据库分析CBR1在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况，并在TCGA数据库中对CBR1的表达与肝癌患者的临床病理特征进行相关性分析。Westernblot检测AKR1C3敲低后对CBR1表达的影响。<br>　　[结果]:<br>　　1.TIMER2.0数据库分析结果发现，与癌旁组织相比，AKR1C3在多种肿瘤中高表达，且在肝细胞癌中显著呈现出更高的表达水平，AKR1C3的高表达组预后较差。TCGA数据库提示，AKR1C3的表达在不同的分级以及不同的T分期（T1、T2、T3、T4）的肝癌患者之间呈现出差异（P＜0.05）。此外，通过TCGA数据库中单因素及多因素Cox回归分析提示，AKR1C3能区别于性别、年龄、grade分级等临床性状作为肝癌患者的独立预后因子。<br>　　2.Westernblot显示：与正常肝细胞LO2相比，AKR1C3、CBR1在HepG2肝癌细胞中表达上调。<br>　　3.免疫组化实验（94例肝细胞癌组织以及86例癌旁组织）结果显示：与癌旁组织相比，AKR1C3在这94例肝细胞癌组织中的表达明显偏高（P＜0.001）。此外，AKR1C3的表达与临床病理特征、生存期未见明显相关性（P＞0.05）。<br>　　4.荧光显微镜下观察显示携带敲低AKR1C3载体的慢病毒转染HepG2细胞效率较高（约80%以上）。Westernblot结果显示，转染敲低AKR1C3慢病毒载体的HepG2细胞中AKR1C3的表达明显低于control组和shNC组（P＜0.0001）。综上所述提示AKR1C3低表达的HepG2细胞株构建成功。<br>　　5.CCK8增殖实验结果显示：shAKR1C3-2组、shAKR1C3-3组在24h、48h、72h、96h、120h的OD450值比control组和shNC组低（P＜0.05），提示敲低AKR1C3使肝癌HepG2细胞增殖能力减弱。<br>　　6.Transwell迁移实验结果表明，与sh-NC相比，shAKR1C3-3组（P＜0.05）、shAKR1C3-2组（P＜0.001）的细胞迁移数量均减少，以上结果提示，敲低AKR1C3能抑制肝癌HepG2细胞的迁移能力。Transwell侵袭实验结果表明，与sh-NC组相比，shAKR1C3-2组、shAKR1C3-3组穿过基质胶的细胞数量减少（P＜0.0001），结果提示敲低AKR1C3能显著抑制肝癌HepG2细胞的侵袭能力。<br>　　7.STRING数据库中推测出CBR1可能与AKR1C3存在相互作用，TCGA数据库分析AKR1C3的表达与CBR1的表达呈现出显著正相关，Co-IP实验证明CBR1在肝癌中与AKR1C3存在相互作用。<br>　　8.在TCGA、GSE数据库中发现，与癌旁组织相比，CBR1在肝细胞癌中都呈现出更高的表达水平。TCGA数据库结果表明，CBR1表达在不同的stage分期（Ⅰ-Ⅳ）、不同年龄、不同的性别的肝癌患者之间呈现差异（P＜0.05）。Westernblot显示shAKR1C3-2转染组HepG2肝癌细胞中CBR1的表达明显低于sh-NC组（P＜0.05），说明敲低AKR1C3可以抑制肝癌细胞中CBR1的表达。<br>　　[结论]:<br>　　1.AKR1C3在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织。<br>　　2.AKR1C3在肝细胞癌HepG2细胞中可与CBR1相互作用，且可正调控CBR1表达。<br>　　3.敲低AKR1C3可抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭。