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果蝇端粒保护蛋白HipHop限制端粒反转座子的机制研究

摘要目的:转座子是一类广泛存在于真核生物的可移动DNA元件。转座子在宿主基因组中不受控制的移动会引起基因组不稳定,可能产生新的突变基因或者影响原有基因的表达,给宿主造成潜在危害。但目前对于宿主调控转座子的具体机制仍然所知甚少,本文以果蝇端粒为模型,研究果蝇宿主如何驯化端粒反转座子为自身所用,旨在通过果蝇端粒保护蛋白调控端粒反转座子的机制研究,揭示宿主调控转座子的普遍规律,为高等生物转座子调控机制的研究提供重要的理论依据。<br>  方法:本文以果蝇端粒保护蛋白HipHop为切入点进行研究。本文的研究通过构建一系列HipHop保守氨基酸位点突变果蝇品系,通过RT-qPCR绝对定量、蛋白质印迹检测突变体中端粒反转座子的表达情况,免疫荧光染色观察过度激活的蛋白在细胞中的分布、核酸原位杂交观察端粒反转座子在基因组中的分布。记录生存曲线检测果蝇寿命、记录每日产卵量检测果蝇生育力。<br>  结果:(1)不同保守位点突变的果蝇表型可分为三类:存活可育、雌性不育、致死。(2)HipHop点突变雌性不育果蝇表型产生的原因,是这些氨基酸位点突变后影响了端粒加帽的功能,导致突变体后代胚胎端粒融合,产生后代胚胎早期发育障碍。(3)E44位点能特异抑制体细胞中端粒反转座子RNA和蛋白表达。该位点突变后,脑组织中HeT-A的ORF1p蛋白聚集形成巨大的球状复合物,包裹大量HeT-A的RNA,同时具有正常靶向端粒的功能。(4)hiphopE44A突变体能激活端粒反转座子转座,导致端粒过度延长。(5)hiphopE44A突变体中端粒反转座子过量表达的中间产物,以及增加的端粒转座子产生的过度延长的端粒,导致雌突变体生育力显著下降。<br>  综上,本文的研究揭示了果蝇端粒保护蛋白HipHop特异抑制体细胞中端粒反转座子表达和转座的关键位点,同时鉴定了一系列不同程度影响端粒加帽功能的保守氨基酸位点。通过本文精细到氨基酸位点的研究,让人们对HipHop的功能有了更加细致的了解。与此同时,文中阐明的HipHop蛋白调控端粒反转座子表达和转座的机制,将为高等生物转座子调控机制的研究提供重要价值。

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