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Circ_0001809增强骨肉瘤细胞株恶性表型及其机制研究

摘要目的:探讨Circ_0001809对骨肉瘤(OS)细胞株恶性表型的影响及miR-183-5p在其中的作用。<br>  方法:(1)通过数据库CirInteraCtome预测Circ_0001809与miR-183-5p的结合位点。<br>  (2)通过双荧光素酶报告基因验证人胚肾细胞(HEK)293T中Circ_0001809与miR-183-5p靶向作用关系。<br>  (3)qRT-PCR实验检测miR-183-5p在成骨细胞hFOB1.19与骨肉瘤细胞株(Saos-2、143B)中的表达量;将Circ_0001809过表达质粒、小干扰RNA转染至Saos-2骨肉瘤细胞株中检测miR-183-5p表达水平,明确Circ_0001809靶向调控miR-183-5p。<br>  (4)基于课题组前期研究发现Circ_0001809在体外促进骨肉瘤细胞株恶性表型,故设计拯救实验进一步验证Circ_0001809对OS细胞株表型的调控是否有miR-183-5p的参与。实验分组为:上调对照组(pCMV-NC)、上调组(pCMV-circ_0001809)、模拟物组(miR-183-5pmimic)、上调与模拟物共转染组(pCMV-circ_0001809与miR-183-5pmimic共转染)。通过CCK-8、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测Circ_0001809调控miR-183-5p对骨肉瘤细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响。<br>  结果:(1)通过生物信息学预测发现miR-183-5p的seeds在Circ_0001809的序列上存在靶点,位置坐标为154~160,context+scorepercentile值为97,提示Circ_0001809有与miR-183-5p靶向结合的生物学基础。<br>  (2)双荧光素酶报告基因证明Circ_0001809与miR-183-5p为靶向相互作用关系(P<0.001)。<br>  (3)qRT-PCR结果表明,与对照组成骨细胞hFOB1.19相比,骨肉瘤细胞株Saos-2中miR-183-5p的表达水平明显降低(P<0.01);miR-183-5p在Circ_0001809过表达后显著下调(P<0.01),而在Circ_0001809下调后明显上调(P<0.001)。<br>  (4)通过CCK-8、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验对骨肉瘤细胞株增殖、迁移与侵袭中的影响结果发现,Circ_0001809能够增强骨肉瘤细胞株增殖、迁移与侵袭等恶性表型,同时转染miR-183-5p模拟物后恶性表型被抑制(P<0.01)。<br>  结论:Circ_0001809通过海绵吸附miR-183-5p促进骨肉瘤细胞株的增殖、迁移与侵袭能力。

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