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TGM1在创伤性脑损伤后的表达及其血清浓度与患者预后的相关性研究

摘要目的:创伤性脑损伤(TraumaticBrainInjury,TBI)在日常工作生活中或是体育竞争中时有发生。TBI致伤机制复杂,其对人体的损害作用主要分为机械性冲击造成的原发性损伤和一系列病理生理过程触发的继发性损伤。后者包括兴奋性毒性、钙超载、氧化应激、神经炎症等。转谷胺酰胺酶1(Transgtaminase1,TGM1)作为转谷胺酰胺酶家族之一的蛋白酶,具有严格钙依赖的催化蛋白质翻译后修饰形成蛋白间交联的功能。已有研究报道,TGM1在急性或慢性神经神经系统疾病中,通过参与氧化应激反应过程损伤神经元。但关于TGM1在TBI后氧化应激损伤神经元中的作用尚未可知。因此本实验的目的是确定TGM1在TBI后的表达情况,为研究TGM1在TBI的神经损伤中的作用提供理论依据和进一步的思路。<br>  方法:首先将小鼠分为假手术组及TBI组,通过对小鼠正常脑组织及损伤脑组织进行高通量测序,得出转录组信息。通过对转录组信息进行生物信息学分析,筛选出差异性基因TGM1。通过构建TBI小鼠模型,采用qRT-PCR、Westernblot对TGM1进行验证并进行功能分析;然后采用qRT-PCR检测颅脑损伤患者TGM1的mRNA表达水平,利用ELISA法检测患者伤后1d血清的TGM1水平,结合GCS评分及伤后6个月GOS预后评分,分析血清TGM1水平与患者预后的相关性。<br>  结果:1.与对照组相比,TBI组中共有2773个差异表达基因,其中1394个基因表达显著上调,1379个基因表达下调。且上调和下调前10的差异表达基因明显聚成两类,组内基因表达差异小,聚类结果好;组间表达差异大,TBI组和对照组组间分类好。差异表达基因中TGM1的表达水平显著高于对照组。2.GO功能富集分析显示上调表达基因主要涉及脂质代谢相关生物过程。GSEA通路分析富集结果涉及了TBI后的免疫应答、炎症、细胞凋亡、线粒体功能障碍、氧化应激等。3.qRT-PCR和WB结果显示:与Sham组相比,TBI后1、3、7天小鼠脑组织中TGM1mRNA和蛋白表达水平均显著上调。4.PCR结果显示:与正常人脑组织相比,TBI患者脑组织中TGM1mRNA的表达水平显著上调。5.Elisa法结果显示:与对照组相比,重型颅脑损伤患者伤后1d血清TGM1水平显著高于轻中组,预后不良组血清TGM1水平显著高于预后良好组,创伤性脑损伤患者血清TGM1水平与患者预后成负相关。<br>  结论:TGM1在小鼠创伤性脑损伤后表达增加,血清TGM1水平测定对于早期评估创伤性脑损伤患者的严重程度具有重要意义。

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