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摘要研究背景<br>　　随着基因测序技术的快速发展，越来越多的长链非编码RNA（LncRNAs）被发现在结直肠癌（Colorectalcancer，CRC）中发挥促进或抑制癌症的作用。近十年国内外的研究表明，LncRNAs的失调对结直肠癌的增殖、血管生成、转移、侵袭、凋亡、干性、抗肿瘤耐药性和基因组不稳定性均有影响，因此具有临床意义。最新的几项研究发现LncRNAs可能对肿瘤免疫和免疫治疗有影响，但研究数量少且尚未清晰地揭示LncRNAs失调对CRC肿瘤免疫微环境中细胞类型和分布的全景图谱的影响及其具体机制。在前期研究中，我们筛选出在CRC组织中显著高表达的LncRNALINC00460，且联合我们之前的研究成果，发现LINC00460的表达水平与基质免疫评分预后预测模型的风险评分成显著正相关，且可能与不同器官的转移瘤及其原发瘤之间的免疫浸润异质性有关。因此，我们认为LINC00460可能在CRC肿瘤免疫中发挥了重要的作用。明确LINC00460在CRC中的生物学功能并探索其影响肿瘤免疫的具体分子机制，能够帮助我们进一步认识和拓展CRC的致病机制分子网络，有利于为CRC的诊治提供全新的思路和可能的靶点，具有积极和深远的临床意义。<br>　　研究目的<br>　　明确LINC00460在CRC生长和转移中作用，以及LINC00460对CRC肿瘤免疫的影响，并阐明其具体分子机制。<br>　　研究方法<br>　　利用本课题组的CRC转录组测序数据和从GEO/TCGA数据库中下载的CRC基因表达谱，通过生物信息学分析，筛选出在人CRC肿瘤和正常结肠组织中差异表达且与患者生存预后相关的LncRNALINC00460。从临床收集102对配对的CRC肿瘤组织和癌旁正常结肠组织，采用qRT-PCR和原位杂交分析验证LINC00460的差异表达。构建LINC00460稳定过表达和敲低的细胞系，通过体外功能实验，如克隆形成、EdU、CCK-8、划痕和Transwell等，研究LINC00460对CRC癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。并通过构建小鼠皮下瘤、肝和肺转移瘤模型在体内研究LINC00460失调对CRC增殖、转移和血管生成的影响。在分子机制方面，利用生物信息学分析锚定LINC00460的下游靶标和作用轴，通过双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫沉淀（RIP）、RNApulldown等实验确定靶标分子的直接结合。并利用构建的稳转细胞系和小鼠CRC肿瘤模型进行qRT-PCR、WB和免疫组化等实验，在体外和体内分别验证LINC00460失调对下游靶点分子和肿瘤微环境中细胞浸润的影响，从而明确LINC00460作用于CRC的具体分子机制。<br>　　研究结果<br>　　LINC00460在癌旁正常结肠、CRC原发肿瘤和远处转移瘤中表达水平逐级升高，并与患者的TNM分期和CMS分子分型等特征显著相关，LINC00460高表达预测患者的不良生存预后。体外和体内功能实验表明，上调或下调LINC00460的表达能够分别促进或抑制CRC细胞的增殖、转移和血管生成。LINC00460过表达能够在CRC肿瘤组织中塑造抑制性免疫微环境，减少了CD8+T细胞和M1型巨噬细胞的浸润，促进了Treg、M2型巨噬细胞和CAF等细胞亚群的浸润。机制研究发现，LINC00460作为miR-186-3p的分子海绵，在转录后水平上解除miR-186-3p对MYC/CD47蛋白翻译的抑制，显著提高了下游靶点分子MYC/CD47amp;PD-L1的蛋白表达水平，从而促进CRC的生长、转移和免疫逃逸。此外，MYC可在转录水平上促进LINC00460的表达水平，从而实现MYC/LINC00460/miR-186-3p/MYC/CD47amp;PD-L1正反馈环路，持续性促进CRC的进展。<br>　　研究结论<br>　　1.LINC00460在CRC原发瘤和转移瘤中的表达水平显著升高，并与患者的TNM分期和CMS分子分型等特征显著相关，LINC00460高表达预测患者的不良生存预后。<br>　　2.LINC00460在体内、外促进CRC细胞增殖、转移和血管形成，并塑造抑制性免疫微环境。<br>　　3.过表达LINC00460阻碍了CD8+T细胞和M1型巨噬细胞的浸润，促进了Treg、M2型巨噬细胞和CAF等细胞亚群的浸润。<br>　　4.LINC00460通过MYC/LINC00460/miR-186-3p/MYC/CD47amp;PD-L1正反馈环路，持续性促进CRC细胞增殖、转移和免疫逃逸。