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摘要炎症反应是机体面对各种致炎因子攻击时产生的一种自我防御反应，过度的炎症反应会对机体健康产生不良影响，并且对伤口的愈合也有着延迟作用。杨树芽作为杨树型蜂胶的胶源物质，其活性成分和生理功能已逐渐受到研究人员的关注。现已证实，杨树芽提取物具有与蜂胶提取物类似的抗炎活性，但其发挥抗炎作用的主要功效成分尚不清晰，而其治疗伤口的传统用途也缺乏理论依据，因此本文将杨树芽提取物作为研究对象，首先利用 AB-8 大孔树脂对其进行分离，获得不同极性的洗脱组分；通过比较杨树芽提取物及其不同洗脱产物对脂肪氧合酶的体外抑制效果，对杨树芽发挥抗炎活性的功效成分进行了探究，在此基础上，通过小鼠背部全层皮肤缺损型伤口模型，研究了杨树芽提取物对小鼠伤口的愈合影响；并以此为依据，筛选合适的辅料，通过工艺优化开发了一款能促进伤口愈合的外敷凝胶剂。主要研究内容和实验结果如下：<br>　　（1）杨树芽提取物的制备、分离及成分分析<br>　　以75%乙醇为提取溶剂，采用超声辅助法对杨树芽中的酚类化合物进行提取，真空浓缩并冷冻干燥后，通过AB-8大孔树脂对其分离，得到50%和80%两个浓度的乙醇洗脱组分。采用比色法对杨树芽提取物及其不同洗脱组分的总酚、总黄酮含量进行测定，其中杨树芽提取物总酚含量为 244.78±1.77 mg/g、总黄酮含量为209.01±10.18 mg/g；50%洗脱组分中总酚、总黄酮含量分别为 263.09±10.92 mg/g、239.99±8.26 mg/g；80%洗脱组分中总酚、总黄酮含量分别为 280.06±5.88 mg/g、242.71±7.18 mg/g。进一步利用 UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS 技术对其酚类化合物进行鉴定，初步判定杨树芽提取物中含有20种黄酮类化合物和2种酚酸酯类衍生物，包括山奈酚、异鼠李素、高良姜素、松属素、柯因及咖啡酸酯类衍生物等；其中50%洗脱组分出峰时间主要集中在 15 min 之前，以异鼠李素、山奈酚、5-甲氧基高良姜素、山奈酚-3-葡萄糖醛、3, 4-二甲氧基槲皮素等黄酮醇类化合物为主，而 80%洗脱组分中的化合物出峰时间集中在 15 min 后，包括松属素、橙皮素、高良姜素、黄岑苷等化合物。<br>　　（2）基于脂肪氧合酶抑制活性的杨树芽提取物中抗炎活性成分分析<br>　　以同源蜂胶提取物作为对照，通过Fe2+氧化-二甲酚橙（FOX）显色法测定了杨树芽提取物及其 50%、80%洗脱组分对脂肪氧合酶的体外抑制活性，三者对脂肪氧合酶的半抑制浓度（IC50）分别为 69.40±3.31 μg/mL、75.84±2.14 μg/mL、56.24±3.24 μg/mL，说明 80%洗脱组分对脂肪氧合酶的抑制效果最佳，并且与同源蜂胶提取物对脂肪氧合酶抑制的 IC50 值相当（IC50=59.34±3.65 μg/mL）。以抑制效果最佳的杨树芽提取物80%洗脱组分为代表，研究了其对脂肪氧合酶的抑制机理，通过酶抑制动力学研究可知80%洗脱组分对脂肪氧合酶为混合型可逆性抑制，进一步通过同步荧光光谱分析及圆二色谱分析发现80%洗脱组分与脂肪氧合酶发生可逆性结合后能增强酶蛋白结构中酪氨酸残基和色氨酸残基附近微环境的疏水性，同时使得脂肪氧合酶二级结构中α-螺旋的含量增加（7.8%至13.6%），β-折叠的含量降低（69.30%至44.20%）。<br>　　（3）杨树芽提取物对小鼠背部皮肤缺损型伤口愈合的影响<br>　　以10%聚维酮碘乳膏作为阳性对照，选择更易获得并且同样具有抗炎活性的杨树芽提取物作为研究对象，探究了其对小鼠背部伤口愈合的影响。为延长杨树芽提取物在皮肤上的附着时间，提高给药效率，将0.5%卡波姆940与杨树芽提取物混合，配制了流动性小、粘度大的药物，其低、中、高剂量分别为2% (w/w)、2.5% (w/w)、3.5% (w/w)。经过10天的外敷给药，从伤口面积变化情况及病理切片观察，可以发现杨树芽提取物能促进伤口的恢复，其伤口周围皮肤组织中羟脯氨酸含量也显著高于空白对照组（p＜0.05），并且与10%聚维酮碘乳膏组效果相当（p＞0.05）。进一步对其外周血白细胞以及组织匀浆液中TNF-α、IL-6炎症因子含量进行测定，发现与空白对照组相比，杨树芽提取物能降低小鼠外周血白细胞数量及组织匀浆液中TNF-α、IL-6炎症因子水平，说明杨树芽提取物能通过调节小鼠体内炎症反应来促进伤口愈合，并且高剂量组具有显著调节作用（p＜0.05）。<br>　　（4）杨树芽提取物外敷凝胶剂的研制<br>　　基于杨树芽提取物对脂肪氧合酶的抑制效果（抗炎活性）及其促进小鼠伤口愈合的能力，以杨树芽提取物为功效成分，卡波姆940为凝胶形成基质，甘油为保湿剂，吐温-80为助溶剂，进行外敷凝胶剂的研制。通过单因素试验及正交试验，对外敷凝胶剂的配方进行优化，最终确定产品的最佳配方为：卡波姆940用量1.00%、甘油用量10.00%、提取物用量3.00%，并制定了其产品质量标准（草案）。