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摘要目的：本研究旨在构建并表征将去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞膜作为仿生载体封装含化疗药物多西他赛(DTX)的聚乳酸-羟基乙酸聚乙二醇共聚物（PEG-PLGA）的新型纳米药物(CPDNs)，并证明其在体内和体外治疗CRPC的有效性。<br>　　方法：该CPDNs是通过将DTX封装到PEG-PLGA纳米颗粒中，并用CRPC细胞膜修饰。我们首次提出了一种新的合成方法，然后用利用透射电子显微镜、傅里叶变换红外光谱、紫外可见光谱和免疫印迹（WB）等技术对制备的CPDNs进行表征。通过荧光标记，定性和定量观察CPDNs的细胞体外摄取情况。然后通过荧光成像和核素成像双模型成像研究CPDNs在体内外治疗CRPC中的作用。此外，我们还用CRPC小鼠肿瘤模型评估CPDNs对CRPC的治疗效果。<br>　　结果：研究使用PLGA为基础原料，选用改良的乳化及蒸发法制备负载DTX的纳米颗粒NPs，并通过共挤压方法首次合成了新型纳米药物CPDNs。研究使用PLGA的DTX纳米粒子(PDNs)为核心，纯化的Du145细胞膜(CMs)作为肿瘤细胞仿生壳，最后运用CMs对PDNs进行表面修饰。用透射电镜(TEM)观察了NPs的外观形貌。CPDNs的形态为球形核壳结构，CPDNs的电镜尺寸为125.4±0.6nm，由于CPDNs中存在CMs,CPDNs的尺寸大于PDNs(102.2±0.5nm)。下一步，使用动态光散射(DLS)方法测量了纳米颗粒的直径和表面电荷。颗粒直径与透射电镜测得的结果相似，CPDNs被包覆后的表面ZETA电位与膜泡水平电位接近。研究通过Westernblotting鉴定了CPDNs中的关键膜蛋白分子，研究表明，Du145细胞膜上的关键蛋白被保留在CPDNs中，提示CPDNs延续了Du145细胞膜的生物学功能。Westernblotting检测了CD44、E-cadherin、CD147和CD47等特征关键蛋白。这些膜蛋白是前列腺癌细胞膜上的激活受体，对肿瘤细胞的同型相互作用和转移的粘附功能起关键作用。研究使用扫描荧光显微镜观察Du145细胞中CMs(红色)和PDNs(绿色)的共定位。黄色表示CMs和PDNs信号成功的共定域，表明CPDNs保持结构特别稳定。下一步，研究了DTX在PBS和1640细胞培养液中的释放功能，以检测DTX在CPDNs中的稳定性。当DTX浓度为0.1mg/ml时，DTX的包封率为52.5%，随着DTX浓度增加，CPDNs几乎没有包封更多的DTX。DTX的释放比率在CPDNs组低，提示由于外壳膜作为扩散障碍，减少药物扩散释放，表明CPDNs结构相对稳定。在体外，为了验证PDNs和CPDNs的稳定性，在1640细胞培养液和PBS细胞培养液中，CPDNs的直径变化很小，而在1640细胞培养液中，PDNs的大小有所增大，考虑因1640细胞培养基中PDNs与蛋白质结合吸附有关，进一步提示细胞膜除具有同型靶向能力外，还能增强PDNs的结构稳定性。荧光显微镜下，Du145细胞对CPDNs的摄取明显高于PDN和红细胞膜包被PDNs(RPDNs)，同时作为对比正常前列腺上皮细胞PrEC，三者摄取无显著差异，表明CPDNs对同型Du145细胞具有特异性靶向能力。研究验证了CPDNs稳定性、生物相容性和体外靶向性，下一步评估了CPDNs在Du145肿瘤小鼠模型体内的靶向情况。研究表明，CPDNs在0.5-、1-、2-、4-、12-和24-h的体内肿瘤显像，在肿瘤中积累有显著差异。CPDNs组在注射24h后肿瘤仍有明显的荧光，而PDNs组肿瘤的荧光可忽略不计。除肿瘤外，PDNs和CPDNs也分布于肾和肝脏。最后，利用SPECT-CT系统验证了CPDNs在CRPC治疗中的优势。与体内的生物成像数据相对应，SPECT-CT更清晰直观地显示CPDNs可以深入到前列腺癌组织中，进一步验证了CPDNs同型靶向前列腺癌的功效，并在循环系统中长期存在。为进一步验证CPDNs在体内治疗CRPC的同型靶向功能，研究通过Du145肿瘤裸鼠成瘤模型，综合评价CPDNs的化疗效果。经过一周的治疗，各组肿瘤生长没有显著差异。但随后CPDN组肿瘤生长较DTX组和PDN组明显受到抑制。为综合评估CPDNs对CRPC的化疗效应，研究发现CPDN的组中位生存时间显著长于其他三组，而且DTX组与PDN组差异无区别。体重变化作为评估化疗药物全身毒性的重要指标，研究比较了不同组给药毒性。研究表明，CPDN组的体重减轻显著少于其他组，提示CPDNs毒副作用更少，化疗耐受性更佳。最后，研究采用免疫组化方法检测治疗后前列腺癌组织中CD34和Ki67的表达水平变化。结果显示，CPDN组Ki-67和CD34蛋白表达水平下降，提示CPDN组明显抑制前列腺癌的致瘤性和血管生成，抗癌作用更强。通过Du145裸鼠皮下肿瘤模型，研究验证了CPDNs在体内可有效抑制前列腺癌，延长小鼠的中位生存时间，毒性更小，提高化疗耐受水平，并且对肿瘤的抑制作用更强。<br>　　结论：细胞膜包封是纳米生物医学研究中的一个新兴热门技术。通过细胞膜包裹纳米颗粒可实现天然细胞膜特性和纳米颗粒特性的结合，不仅提高了纳米药物的生物相容性，并且具有更佳的靶向和循环特性。在这项研究中，我们构建一种新型同源靶向仿生纳米颗粒CPDNs，使用CRPC细胞膜(Du145)包裹多西他赛DTX(PDN)的NPs(PLGA)，保留了前列腺癌细胞膜的生物学功能。结果表明CPDNs呈球形，具有核壳结构，CPDNs具有与癌细胞膜同源的靶向机制和免疫逃逸能力，对CRPC具有良好的靶向能力，血液循环时间长，在体内外显着抑制肿瘤生长，延长生存时间。使用活体荧光和核素双模型成像，验证了CRPC细胞膜涂层所提供的特异性同型靶向性，并且在具有CRPC肿瘤的小鼠模型中，CPDNs治疗效果显著提高。CPDNs实现了对于CRPC靶向化疗，作为一种新型的细胞膜包裹纳米颗粒技术，为肿瘤的特异性靶向化疗提供了新的思路。