检索历史 清除

摘要目的：通过研究不同能量的低能量钕激光(Nd:YAG)对人牙周膜干细胞（hPDLSCs）的增殖及迁移情况，在蛋白水平和基因水平评价低能量钕激光影响人牙周膜干细胞归巢是否与 SDF-1/CXCR4 信号通路有关，从而为牙周组织再生及激光的临床应用提供实验数据及理论依据。<br>　　方法：收集于河北医科大学口腔医院口腔颌面外科就诊的13岁-20岁患者需正畸拔除的前磨牙或第三磨牙（伦理审查批号：【2022】005），不伴有牙周及牙体等疾病，获取其牙周膜组织，经组织块法培养人牙周膜干细胞并采用成骨、成脂多系分化潜能、流式细胞术及免疫荧光方法对其进行鉴定。将培养并鉴定成功的人牙周膜干细胞用于后续实验。采用不同功率（0W，0.25W，0.5W，1W，1.5W）的低能量Nd:YAG激光（MSP， 10Hz，30s，300um光纤，距离细胞1cm）对人牙周膜干细胞进行照射，CCK8法检测在第1、3、5、7天人牙周膜干细胞的增殖情况，并选择出最佳的激光照射参数。之后将细胞分为5组：对照组（无Nd:YAG激光照射组）， SDF-1组，AMD3100组（抑制剂组），Nd:YAG激光照射组，Nd:YAG激光照射组+AMD3100组，采用CCK8法筛选出的最佳照射参数进行Tran swell实验，观察经激光照射后人牙周膜干细胞的迁移情况，同时观察加入SDF-1/CXCR4信号通路阻滞剂AMD3100后其迁移量是否改变；采用E LISA实验和RT-PCR实验分别在蛋白及基因水平评估经钕激光照射后SD F-1的表达量。统计学分析采用SPSS 21.0 软件进行。<br>　　结果：1.利用组织块法可以成功培养出成纤维样细胞；经成骨、成脂多向分化潜能鉴定，流式细胞术及免疫荧光鉴定后，所培养成纤维样细胞确为人牙周膜干细胞。<br>　　2. CCK8细胞增殖实验检测：与对照组相比，Nd:YAG激光功率为1W时，在2、3、5、7天时间点OD值增加（Plt;0.05），细胞增殖速率加快；Nd:YAG激光功率为1.5W时，OD值降低（Plt;0.05），细胞增殖速率减慢；Nd:YAG激光功率为0.25、0.5W时，OD值无统计学差异（ Pgt;0.05 ），增殖速率并无明显改变。故我们采用功率为1W的参数进行后续实验。<br>　　3.Transwell实验检测结果：对照组细胞穿孔数量（956.5±51.74），加入阻滞剂AMD3100细胞穿膜数量（981.5±21.15），SDF-1组细胞穿膜数量（1253±87.21），Nd:YAG激光照射细胞组细胞穿孔数量（1336±48.5 4），经激光照射后细胞穿孔数量明显增多，且差异具有统计学意义（Plt;0 .05）；Nd:YAG激光照射后加入SDF-1/CXCR4信号通路抑制剂AMD310 0后细胞穿孔数量（1044±22.13），与激光照射组相比细胞穿孔数量明显减少，且差异具有统计学意义（Plt;0.05）。统计学分析可以看到 Nd:YAG激光照射组、SDF-1 组高于对照组，结果有显著差异。AMD3100 组与Nd:YAG激光+AMD3100组较对照组迁移量少，有显著差异。这说明 Nd:YA G激光与 SDF-1 的作用类似，其可能是通过 SDF-1/CXCR4 信号通路促进hPDLSCs 的迁移。<br>　　4.ELISA实验结果表明：与对照组相比，Nd:YAG激光照射组细胞上清液中SDF-1浓度增高，差异具有统计学意义（Plt;0.05）；加入SDF-1/CX CR4信号通路阻制剂AMD3100后，SDF-1浓度减少，差异具有统计学意义（Plt;0.05），从蛋白水平说明Nd:YAG激光可能通过SDF-1/CXCR4信号通路影响人hPDLSCs迁移。<br>　　5. RT-PCR实验结果表明：与对照组相比，Nd:YAG激光照射组<br>　　SDF-1基因相对表达量增高，差异具有统计学意义（Plt;0.05）；加入SDF-1/CXCR4信号通路阻制剂AMD3100后，SDF-1基因表达量减少，差异具有统计学意义（Plt;0.05），从RNA水平说明Nd:YAG激光可能通过SDF-1/CXCR4信号通路影响hPDLSCs迁移。<br>　　结论：1.采用组织块培养法成功培养出hPDLSCs，为后续实验打下坚实的基础。<br>　　2.合适参数的低能量Nd:YAG可以提高hPDLSCs的增殖迁移能力，提高间充质干细胞的归巢效率。<br>　　3.低能量激光可以通过SDF-1/CXCR4信号通路调控hPDLSCs的归巢，这是低能量激光促进牙周组织再生的可能机制之一。