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摘要研究目的：<br>　　本研究旨在通过建立T2DM大鼠模型，探讨8周运动干预和/或二甲双胍给药干预对T2DM大鼠肝脏功能以及肝脏TLR4/MyD88炎症信号通路的影响，为运动与二甲双胍干预治疗糖尿病肝病提供一定的理论依据。<br>　　研究方法：<br>　　将8周龄，体质量在350－400g的雄性SD大鼠，适应性饲养1周后，随机分为正常组和糖尿病建模组。正常组（A组，n=8）大鼠给予普通饲料喂养，糖尿病建模组大鼠给予高脂饲料喂养6周，腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ，30mg/kg·体重），建立成T2DM大鼠模型。将建模成功的T2DM大鼠随机分为糖尿病模型组（B组，n=8）、糖尿病运动组（C组，n=8）、糖尿病二甲双胍组（D组，n=8）、糖尿病运动+二甲双胍组（E组，n=8）。C组、E组大鼠的运动干预方式采用8周有氧间歇训练。具体的运动干预方案为：在正式训练前进行1周的适应性训练，并在第2周开始正式的有氧间歇训练。大鼠首先进行10min的热身运动，然后在22m/min、7min和15m/min、3min的训练强度间交替进行5次循环，每天运动时间共计60min，每周5天。二甲双胍给药干预方案：将二甲双胍溶于生理盐水中，D组和E组按照250mg/kg·体重于每日早上8:00灌胃给药，A组、B组、C组则按体重给予等体积的生理盐水。在各组完成8周的运动和/或二甲双胍给药干预后，将大鼠称重，按体重腹腔注射麻醉药，剖腹，取血液和肝脏。取血液进行GLU、HbA1c、AST和ALT检测；取部分肝脏分装于EP管中，先在液氮冷冻，后全部放在-80℃冰箱中储存，用于Westernblot实验；将另一部分肝组织放置于4%多聚甲醛、2.5%戊二醛中固定保存，以用于石蜡切片和透射电镜切片制备。<br>　　研究结果：<br>　　（1）与A组大鼠相比，B组、C组、D组大鼠血GLU、HbA1c、AST和ALT水平显著高于A组（Plt;0.01），E组大鼠血GLU、HbA1c、ALT水平显著高于A组（Plt;0.01）。与B组大鼠相比，C组大鼠血GLU、AST和ALT水平显著低于B组（Plt;0.01或Plt;0.05）；D组、E组大鼠血GLU、HbA1c、AST和ALT水平显著低于B组（Plt;0.01或Plt;0.05）。与C组大鼠相比，D组大鼠GLU水平显著低于C组（Plt;0.01）；E组大鼠血GLU、AST和ALT水平显著低于C组（Plt;0.01）。与D组大鼠相比，E组大鼠ALT水平显著低于D组（Plt;0.01）。<br>　　（2）肝脏HE染色结果比较：A组大鼠肝脏组织构造完整清晰，形态正常，肝小叶结构清晰，排列整齐，肝细胞索排列规则，肝细胞核清晰，肝血窦未见扩张。与A组相比，B组大鼠肝脏组织构造完整性较差，肝小叶结构不清晰，边界模糊，排列紊乱，肝细胞索排列紊乱，肝细胞较大，排列疏松，肝细胞胞质疏松淡染，肝血窦扩张明显。经运动干预、二甲双胍给药干预后，与B组相比，C组、D组、E组大鼠肝脏组织病理改变有所减轻，肝小叶结构轻微模糊，肝细胞索排列较清晰，肝血窦扩张减小。与C组相比，E组大鼠肝组织结构更加清晰完整，肝细胞索排列较规则，肝细胞核较清晰，肝血窦扩张明显减小，与正常形态较为接近。<br>　　肝脏MASSON染色结果比较：A组大鼠无明显的蓝染纤维。与A组相比，B组大鼠蓝色区域面积变大，蓝染纤维明显并沉积于血管、汇管区、窦周隙，明显的纤维间隔将肝细胞分割，纤维化严重。经运动干预、二甲双胍给药干预后，与B组相比，C组、D组、E组大鼠蓝色区域面积减小，蓝染纤维部分减轻。与C组相比，E组大鼠蓝色区域面积较少，纤维化程度减轻，其形态与A组大鼠更为接近。<br>　　肝脏PAS染色结果比较：A组大鼠染色程度均匀，糖原呈现紫红色，细胞核呈现浅蓝色，细胞间界线清晰。与A组相比，B组大鼠肝组织染色程度不均匀，糖原颗粒增加且染色加深。经运动干预、二甲双胍给药干预后，C组、D组、E组大鼠与B组相比，糖原颗粒呈现减少趋势。与C组相比，E组大鼠糖原颗粒减少。<br>　　（3）Westernblot实验检测结果比较：与A组大鼠相比，B组大鼠肝脏p-AMPK/AMPK低于A组（Plt;0.05）；C组、D组、E组大鼠肝脏p-AMPK/AMPK显著高于A组（Plt;0.01或Plt;0.05）。与B组大鼠相比，C组、D组、E组大鼠肝脏p-AMPK/AMPK显著高于B组（Plt;0.01）。与C组大鼠相比，E组大鼠肝脏p-AMPK/AMPK显著高于C组（Plt;0.05）。与D组大鼠相比，E组大鼠肝脏p-AMPK/AMPK显著高于D组（Plt;0.05）。<br>　　与A组大鼠相比，B组、C组大鼠肝脏TLR4、MyD88、p-NFκB、p-IkB、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的表达以及p-NFκB/NFκB、p-IkB/IkB显著高于A组（Plt;0.01或Plt;0.05）；D组大鼠肝脏TLR4、MyD88、TNF-α、IL-1β蛋白的表达以及p-NFκB/NFκB、p-IkB/IkB显著高于A组（Plt;0.01或Plt;0.05）。与B组大鼠相比，D组、E组大鼠肝脏TLR4、MyD88、p-NFκB、p-IkB、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的表达以及p-NFκB/NFκB、p-IkB/IkB显著低于B组（Plt;0.01或Plt;0.05）。与C组大鼠相比，E组大鼠肝脏TLR4、MyD88、p-NFκB、p-IkB、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白的表达以及p-NFκB/NFκB、p-IkB/IkB显著低于C组（Plt;0.01或Plt;0.05）。<br>　　（4）肝脏透射电镜结果比较：A组大鼠核膜光滑，核孔清晰可见，细胞核形态正常且规则，染色质分布均匀，胞质内线粒体结构清晰，含量丰富，排列规则，内质网形态正常。与A组相比，B组大鼠染色质分布不均匀，线粒体出现融合、溶解甚至消失，数量大量减少，分布稀疏，形状不规则，胞浆中大量脂滴浸润，内质网扩张、断裂，表面核糖体脱落。经二甲双胍给药干预、运动干预后，与B组相比，C组、D组、E组大鼠均呈现线粒体数量增加，分布略稀疏，细胞器形态结构得到改善。与C组相比，E组大鼠核孔较清晰，细胞核形态较规则，染色质分布略均匀，胞质内线粒体数量增加，含量丰富，形态较规则，各细胞器形态结构改善明显。<br>　　研究结论：<br>　　（1）运动与二甲双胍给药干预均可以降低T2DM大鼠血糖、改善肝脏组织学形态，保护肝脏功能。<br>　　（2）运动与二甲双胍给药干预均可以激活AMPK，抑制肝脏TLR4/MyD88炎症信号通路中相关炎症因子的表达，改善T2DM大鼠肝脏炎症。相比于运动单独干预，运动与二甲双胍联合干预在降血糖、改善肝组织学形态，保护肝脏功能，减轻炎症方面效果较显著。