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摘要第一部分Dicer通过调节白介素8抑制肝细胞癌进展<br>　　目的：我们之前的研究证实Dicer抑制肝细胞癌（HCC）细胞的生长、迁移及侵袭，并促进凋亡。白细胞介素8（IL-8）水平升高可导致肿瘤的不良预后。因此，本研究探讨Dicer和IL-8之间的相互作用及其对HCC的影响。<br>　　方法：用绿色荧光蛋白（GFP）标记的Dicer过表达慢病毒（pCMV-Dicer）和阴性对照慢病毒（pCMV-NC）分别转染肝癌细胞系SMMC-7721进行后续实验。采用Westernblot验证转染后Dicer蛋白表达量，通过CCK-8实验、划痕愈合实验和transwell小室实验评估Dicer过表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响作用。通过流式免疫荧光微珠测定来检测IL-8的水平。<br>　　结果：<br>　　1.Dicer过表达细胞的增殖、迁移及侵袭能力较SMMC-7721及阴性对照细胞显著下降，提示Dicer抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭。<br>　　2.与阴性对照细胞相比，Dicer过表达细胞分泌IL-8水平显著降低，提示Dicer抑制肝癌细胞IL-8水平的分泌。<br>　　3.加入重组人白介素8（rhIL-8）后，促进了阴性对照及Dicer过表达细胞的增殖、迁移及侵袭，说明IL-8促进肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭，并降低了Dicer过表达对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。<br>　　4.加入瑞帕利辛后抑制了阴性对照及Dicer过表达细胞的增殖、迁移及侵袭，说明瑞帕利辛抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭，并增强了Dicer过表达对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。<br>　　小结：<br>　　Dicer抑制肝癌细胞IL-8水平的分泌，并通过调节IL-8抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭。<br>　　第二部分Dicer通过调节白介素8增效仑伐替尼抗肿瘤作用<br>　　目的：我们之前的研究已经证实Dicer通过调节IL-8抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭，本研究我们进一步探讨Dicer、IL-8与仑伐替尼抗肿瘤作用之间的关系。<br>　　方法：通过CCK-8、克隆形成、划痕愈合和transwell小室实验评估仑伐替尼在体外对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭的影响。通过裸鼠皮下异种移植瘤评估Dicer和仑伐替尼在体内对肝癌细胞生长的影响。采用免疫组化方法检测CD31表达来评估移植瘤微血管密度（MVD），流式免疫荧光微珠测定用来检测肝癌细胞IL-8水平的分泌。<br>　　结果：<br>　　1.加入仑伐替尼与细胞共培养后，仑伐替尼抑制了阴性对照及Dicer过表达细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力，说明仑伐替尼抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭，并增强了Dicer过表达对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的抑制作用。此外，加入仑伐替尼后，Dicer过表达细胞的抑制作用较阴性对照细胞更加明显，说明Dicer增强了仑伐替尼对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的抑制作用。<br>　　2．仑伐替尼与SMMC-7721细胞共培养后，细胞上清中IL-8水平显著降低，说明仑伐替尼抑制了肝癌细胞IL-8水平的分泌。将仑伐替尼与阴性对照及Dicer过表达细胞共培养检测细胞上清IL-8水平，结果显示Dicer过表达细胞分泌IL-8水平较阴性对照细胞显著下降，提示Dicer增强了仑伐替尼对肝癌细胞IL-8水平分泌的抑制。因此，Dicer通过抑制IL-8分泌增效仑伐替尼抗肿瘤作用。<br>　　3.通过裸鼠皮下成瘤实验证实仑伐替尼在体内环境抑制了阴性对照和Dicer过表达细胞异种移植瘤的生长，并且对Dicer过表达细胞移植瘤的抑制作用有更加明显趋势，说明Dicer增强了仑伐替尼对肝癌细胞异种移植瘤生长的抑制。<br>　　4.CD31免疫组化结果显示仑伐替尼降低了阴性对照和Dicer过表达细胞移植瘤微血管密度（MVD），且Dicer过表达细胞移植瘤MVD下降较阴性对照细胞更加明显，提示Dicer增强了仑伐替尼对肝癌细胞异种移植瘤微血管形成能力的抑制。<br>　　小结：<br>　　1.Dicer通过调节IL-8增强仑伐替尼对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭的抑制。<br>　　2.Dicer增强仑伐替尼对肝癌细胞的异种移植瘤生长及微血管形成能力的抑制。<br>　　第三部分循环血白细胞介素8水平与实体瘤患者免疫相关不良事件关系的研究<br>　　目的：探讨循环血白细胞介素8（IL-8）水平与接受抗PD-1/PD-L1治疗的肿瘤患者免疫相关不良事件（irAE）的关系。<br>　　方法：回顾性分析2019年11月至2022年5月于河北医科大学第四医院接受抗PD-1/PD-L1治疗的肿瘤患者，收集外周血，采用流式免疫荧光微珠测定检测IL-8水平，采用χ2检验分析IL-8水平与肿瘤患者临床资料及发生irAE之间的关系。随访时间截至2023-03-01。<br>　　结果：<br>　　1.本研究共纳入71例收集循环血进行IL-8水平检测的接受抗PD-1/PD-L1治疗的实体瘤患者，其中49例在首次应用抗PD-1/PD-L1治疗前检测IL-8水平（基线IL-8），23例患者在发生irAE时检测IL-8水平，13例患者为任意时间检测。其中40例患者发生了irAE，31例未发生irAE，irAE发生率为56.3%。发生1-2级irAE的患者共33例，发生3-4级irAE的患者7例，发生的irAE主要为内分泌疾病、心脏毒性、皮肤损伤、结肠炎/腹泻、肺炎、肝功能损伤、肌痛、肌酐升高、血小板降低、结膜炎。其中3-4级irAE主要发生在皮肤损伤、结肠炎/腹泻、肝功能损伤、肌酐升高及血小板降低。<br>　　2.性别、年龄、临床分期、治疗线数、ECOG评分及中性粒-淋巴细胞比率（NLR）与irAE的发生无明显关系。irAE的发生与基线IL-8水平高低相关，发生irAE的患者具有较低的基线IL-8水平（P=0.024）。纵向监测9例发生irAE的患者IL-8水平变化发现，其中8例患者的IL-8水平在发生irAE时呈上升趋势，1例患者呈下降趋势。<br>　　小结：应用抗PD-1/PD-L1治疗的实体瘤患者，发生irAE者通常具有较低的基线IL-8水平，且发生irAE时患者IL-8水平呈上升趋势。<br>　　结论：<br>　　1.Dicer抑制肝癌细胞IL-8水平的分泌，并通过调节IL-8抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭作用。<br>　　2.Dicer通过调节IL-8增强仑伐替尼对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭的抑制。<br>　　3.Dicer增强仑伐替尼对肝癌细胞的异种移植瘤生长及微血管形成能力的抑制。<br>　　4.应用抗PD-1/PD-L1治疗的实体瘤患者，发生irAE者通常具有较低的基线IL-8水平，且发生irAE时患者IL-8水平呈上升趋势。