摘要目的:双解丝蛋白1(Twinfilinactinbindingprotein1,TWF1)在大部分肿瘤组织中呈高表达,但目前在肺癌中研究甚少。本研究利用生物信息学技术在TCGA数据库中进行数据挖掘分析并使用临床独立样本进行验证,同时构建敲除TWF1细胞模型进行体外细胞功能实验。来探讨TWF1在肺腺癌(Lungadenocarcinoma,LUAD)组织中的表达情况和临床预后价值,发掘其作为一种新的生物标志物的潜力,为肺癌患者的早期诊疗提供新思路。<br> 方法:1.TWF1的临床意义分析:通过TCGA数据库分析TWF1在LUAD癌组织及其配对癌旁组织之间的表达差异;分析了TWF1的表达水平与LUAD患者临床病理学特征(年龄、性别、TNM分期及病理学分期)的相关性;通过Kaplan-MeierPlotter数据库分析TWF1表达水平与LUAD患者预后之间的关系;通过单因素和多因素Cox回归分析验证TWF1是否能作为LUAD的一个独立的预后因素;ROC曲线用于评估TWF1对LUAD的诊断价值。<br> 2.临床样本验证:通过蛋白免疫印迹(Western-Blot,WB)及免疫组织化学染色(Immunohistochemical,IHC)分析验证12例配对临床样本(LUAD癌组织及其配对癌旁组织)中TWF1的表达情况。<br> 3.体外细胞功能实验:为了探究TWF1对LUAD细胞生物学行为的影响,选取了A549细胞,采取细胞转染法构建了敲除TWF1细胞模型,通过Western-Blot技术检测转染细胞中TWF1表达水平,确认模型是否构建成功。最后利用CCK-8、划痕实验以及Transwell实验探究TWF1对A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。<br> 结果:1.在TCGA数据库中,TWF1在LUAD癌组织中表达水平显著升高(plt;0.001),TWF1的表达水平与T分期、N分期及病理学分期相关:在N分期中,N2期患者的TWF1表达显著高于N0期(p=0.021);T分期中,拥有更高T分期的患者TWF1的表达水平更高(plt;0.05);在临床分期中,III期患者的TWF1表达显著高于I期(p=0.02)。而TWF1表达水平与年龄、性别、M分期无关。在Kaplan-MeierPlotter数据库中,TWF1表达水平升高与LUAD患者较差的OS显著相关(p=0.002),TWF1低表达的患者的拥有更好的PFS(p=0.016)。单因素和多因素Cox回归分析验证了TWF1的表达水平升高是LUAD患者预后的独立危险因素。ROC曲线显示TWF1表达能准确区分肿瘤及正常组织,具有一定的诊断价值(AUC=0.891)。<br> 2.收集我院胸外科12例LUAD癌组织及其配对癌旁组织,Western-Blot及免疫组化染色分析结果显示TWF1在LUAD癌组织中显著高表达(plt;0.001)。<br> 3.体外细胞功能实验显示,干扰TWF1的表达可抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力。<br> 结论:1.TWF1在LUAD癌组织中呈显著高表达,且TWF1表达水平与T分期、N分期及病理学分期相关,TWF1高表达预示着患者预后不良,TWF1可作为LUAD患者预后不良的独立危险因素,TWF1具有作为LUAD的一个新的诊断生物标志物的潜力。<br> 2.干扰TWF1的表达可抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力。
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