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摘要目的：乳腺癌是全球女性发病率最高的恶性肿瘤，其中，人表皮生长因子受体2 （Human epidermal growth factor receptor 2, HER2）阳性乳腺癌占全部乳腺癌病例的15%-20%，具有恶性程度高、侵袭性强、化疗耐药性高、内分泌治疗效果差、复发转移早、预后差等特点。曲妥珠单抗是一种靶向HER2单克隆抗体，是治疗HER2阳性乳腺癌的关键靶向药物。曲妥珠单抗经治早期HER2阳性乳腺癌10年复发风险仍然高达30%左右，后续帕妥珠单抗、TKI、ADC类等靶向治疗在一定程度上优化了治疗策略和克服了部分耐药，但HER2阳性乳腺癌的治疗仍然面临挑战和临床所需。因此，阐明曲妥珠单抗靶向治疗耐药的潜在机制对于改善HER2阳性乳腺癌患者的预后至关重要。我们前期发现氯离子/碳酸氢盐转运体SLC26A9在HER2阳性乳腺癌的发生发展中发挥重要调节作用。但是，SLC26A9是否与HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗耐药相关尚不清楚。因此，本课题的主要目的是初步探索SLC26A9在HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗耐药过程中的作用，期望提高HER2阳性乳腺癌患者曲妥珠单抗靶向治疗敏感性，改善患者预后。<br>　　方法：1）免疫组织化学染色（IHC）检测SLC26A9在HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗（赫赛汀）不敏感组织中的表达情况；2）建立耐药细胞株（SKBR3-TR），利用CCK8、IC50测定法验证耐药细胞株是否成功建立。通过免疫印迹技术（WB）检测原发性耐赫赛汀的HER2（+）细胞株（HCC-1419、JIMT-1、HCC-1569）、继发耐药细胞株SKBR3-TR、赫赛汀敏感细胞株BT474、SKBR3与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A之间的SLC26A9表达；3）采用慢病毒在JIMT-1细胞株中沉默SLC26A9，构建沉默JIMT-1乳腺癌细胞稳转株；利用WB技术验证沉默稳转株是否构建成功；WB检测耐药细胞株（SKBR3-TR）和亲本细胞株（SKBR3）与EMT相关蛋白表达差异，划痕实验验证SKBR3-TR和SKBR3的增殖迁移能力区别；4）划痕实验、克 隆形成实验观察SLC26A9下调后乳腺癌耐药细胞株迁移、增殖能力的改变；细胞生长曲线和克隆形成实验测定耐药细胞株SLC26A9沉默后的对曲妥珠单抗的敏感性；5）WB技术检测SLC26A9沉默后与其对照组相比细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡相关蛋白的表达差异，并进一步探索SLC26A9对HER2阳性乳腺癌耐药调节的相关机制。<br>　　结果：IHC显示SLC26A9在曲妥珠单抗不敏感患者中的表达明显高于曲妥珠单抗敏感患者。SLC26A9在培养的继发性耐曲妥珠单抗细胞株SKBR3-TR中的表达较其亲本细胞株SKBR3明显上调；且与正常人乳腺上皮细胞MCF10A相比，SLC26A9在原发性耐药细胞株JIMT-1、HCC1419、HCC1569中明显上调。另外，耐药细胞株在培养过程中出现细胞间分离增加和伪足形成，WB实验结果验证在耐药细胞中EMT相关上皮标志物E-cadherin表达下调， EMT相关间质标志物（ Vimentin、N-cadherin）表达上调，表明耐药发生过程中可能经历了上皮-间质转化。在SLC26A9内源性耐曲妥珠单抗细胞株中表达最高的JIMT-1细胞系中沉默SLC26A9后，通过增殖和迁移实验表明SLC26A9沉默可以增加JIMT-1细胞系对曲妥珠单抗的敏感性；并且SLC26A9沉默可以调节PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路。<br>　　结论：SLC26A9在曲妥珠单抗不敏感组HER2阳性乳腺癌组织中相对于敏感组明显上调。另外，SLC26A9在曲妥珠单抗原发性耐药的HER2阳性乳腺癌细胞中明显上调，且SLC26A9在培养的曲妥珠单抗获得性耐药的HER2阳性乳腺癌细胞中相对于其亲本细胞明显上调。而且，沉默SLC26A9后可以增加JIMT-1细胞对曲妥珠单抗的敏感性。相关分子机制研究表明SLC26A9可能通过调节PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路来调节HER2阳性乳腺癌的曲妥珠单抗耐药性。