摘要目的:通过下调兔眼 Tenon’s囊中 HSP47,观察 COL-I、COL-III 蛋白的表达,并探索 HSP47与术后 Tenon’s囊纤维化的关系。<br> 方法:选择 1周岁体重约 2kg雌性新西兰白兔,共 60只,随机分成 4组,A组:单纯手术组,B组:下调组,C组:空质粒组,D组:空白对照组。四组分别在术后 1w、2w、3w随机取 5只兔子耳缘静脉注射过量麻药处死,取术区 Tenon’s 囊组织用 HE 及 Masson 染色观察组织病理学特征,免疫组化及蛋白免疫印记观察 HSP47、COL-I和 COL-III蛋白表达水平, qRT-PCR观察 HSP47、COL-I和 COL-III基因表达水平。<br> 结果:<br> 1.组织腺病毒转染情况:空质粒组与下调组病毒载体转染成功,各时点均能观察到免疫荧光蛋白持续稳定表达,各时点无明显差异。<br> 2. HE染色结果特点:单纯手术组、空质粒组与空白组比较,术后1w、2w胶原纤维持续增加;术后3w,组织中胶原纤维合成较前明显减少;将下调组与单纯手术组、空质粒组比较,下调组胶原合成趋势同手术组及空质粒组,但胶原纤维合成量、及纤维化程度远低于单纯手术组及空质粒组。<br> 3. Masson染色结果特点:单纯手术组、空质粒组与空白组相比,术后1w、2w,单纯手术组及空质粒组胶原纤维合成持续增加,组织紧密;术后3w,胶原纤维较前减少。下调组与单纯手术组、空质粒组比较,下调组各时点胶原纤维均低于单纯手术组与空质粒组,胶原纤维排列较为规则,并且新生血管形成较少。<br> 4.免疫组化结果特点:下调组各时点HSP47、COL-I、COL-III 蛋白均低于单纯手术组和空质粒组。<br> 5.组织中蛋白水平表达特点:下调组各时点HSP47、COL-I蛋白表达均低于单纯手术组和空质粒组,差别具有统计学意义(P<0.05)。下调组术后1w、2w,COL-III蛋白表达均低于单纯手术组和空质粒组;术后3w,COL-III蛋白表达均低于单纯手术组,差别具有统计学意义(P<0.05)。上述三组术后2w时蛋白表达均较1w时升高,3w时均下降,差别具有统计学意义(P<0.05),空白对照组各时点差别无统计学意义(P>0.05)。<br> 6. HSP47、COL-I、COL-III蛋白相关性分析结果:术后1w、2w、3w,3种蛋白表达均呈正相关(P<0.01),COL-I蛋白与HSP47蛋白相关系数大于COL-III蛋白与HSP47蛋白相关系数。<br> 7.组织中qRT-PCR结果示:下调组各时点HSP47、COL-I、COL-III mRNA均低于单纯手术组和空质粒组,差别具有统计学意义(P<0.05)。单纯手术组、下调组、空质粒组三组术后2w时mRNA含量均较1w时升高,3w时均下降,差别具有统计学意义(P<0.05),空白对照组各时点间差别无统计学意义(P>0.05)。<br> 结论:兔眼小梁切除术后,通过下调HSP47,能减少Tenon’s囊组织中COL-I、COL-III合成,减轻Tenon’s囊纤维化。
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