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摘要研究背景：<br>　　随着计算机断层扫描（CT）在肺部疾病筛查及随访中的广泛使用，早期肺腺癌结节检出率不断增高。电视辅助胸腔镜手术（VATS）因其具有微创、快速康复等优势，成为了这类患者手术的首选方式。但是由于肺腺癌结节本身特点，VATS期间的目标结节识别有时很困难，术中结节识别失败率极高，需要扩大切除范围或改为开胸手术。目前肺结节的定位方式多样，但是都存在各自的缺点与不足，因此临床急需一种简单、快速、无创的定位方式。术中荧光成像因其无辐射、无创、操作简单、不需要预先了解结节的位置、可能发现影像学阴性的结节、实时、直观等特点，将有望成为术中病变定位研究的趋势。金纳米粒子（AuNPs）在癌症检测、诊断和治疗中都有着较多的研究进展，AuNPs在体内非常稳定且无免疫原性，并且毒性低。它们通过被动靶向（增强渗透性和保留效应），或者主动靶向，能很容易的通过肿瘤组织的新生血管和淋巴系统，提高成像诊断灵敏度和治疗效果。在给药方式上，目前由许多纳米粒子和微粒制剂所制备的造影剂和药物载体（包括干粉、气雾剂和喷雾剂）都能通过气管内输送来提高疾病的治疗效果，因此靶向荧光金纳米簇通过气道给药也有望提高靶病灶的摄取，成为定位的优选方式。<br>　　研究目的：<br>　　旨在制备一种新型的肺腺癌靶向的金纳米簇，通过气道给药这种无创、局部的方式能够特异性的识别肺腺癌组织，并发出明亮、持久的荧光，可以在术中对肺腺癌进行荧光成像，为术中识别肺腺癌提供指导帮助，提高VATS术中肺腺癌定位的准确率。<br>　　研究方法：<br>　　首先制备Au-GSH-antiNapsinA（NapA-AuNCs），并对其理化性质及光学特性进行表征。表征实验中使用透射电子显微镜（TEM）、动态光散射（DLS）对NapA-AuNCs的形态、尺寸进行观察；通过Zeta电势测试、X线光电子能谱、红外光谱、紫外吸收光谱判断NapsinA抗体与AuNCs是否连接成功，并测得其表面电荷情况、光学特性、溶液及时间的稳定性；制备人工气道黏液模拟物，定性及定量的检测NapA-AuNCs在气道黏液模拟物中的黏液穿透情况，并通过荧光共聚焦显像观察NapA-AuNCs在小鼠气道中的黏液穿透情况。<br>　　在肺腺癌细胞A549及正常肺上皮细胞Beas-2b进行细胞活力检测（CCK-8）、细胞成像实验（荧光共聚焦显像、固态光源高内涵细胞成像）、荧光强度检测（流式细胞术）、细胞毒性实验（活/死细胞染色、流式细胞术、溶血实验）等，制定NapA-AuNCs的安全浓度，观察NapA-AuNCs的成像效果、安全性及绘制荧光时间曲线。随后构建A549细胞肿瘤球模型，使用固态光源高内涵细胞成像测试NapA-AuNCs对肿瘤组织的穿透能力，并绘制荧光时间曲线。<br>　　最后，建立小鼠皮下异种移植瘤模型，观察NapA-AuNCs与AuNCs通过尾静脉给药的显像差异，并观察静脉给药最强荧光显像所需时间。通过肺内注射法构建小鼠肺原位异种移植瘤模型，观察气道给予NapA-AuNCs后不同时间的肺腺癌荧光显像情况，观察气道给药达到稳定的荧光显像所需时间。通过尾静脉注射法构建小鼠肺原位异种转移瘤模型，观察气道给药后NapA-AuNCs对不同大小、不同位置的肺腺癌的荧光定位作用。观察NapA-AuNCs的药代动力学变化、体内分布、代谢情况及安全性检测。<br>　　统计方法采用t检验及方差分析，统计分析软件使用GraphPadPrism9，绘图软件使用Origin2022及GraphPadPrism9，图像处理软件使用ImageJ1.53。<br>　　研究结果：<br>　　一种靶向肺腺癌的纳米簇NapA-AuNCs制备成功，可发出稳定且明亮红色荧光，其尺寸为5.1nm，水合半径为120nm，表面带负电。发射光范围在600-650nm，荧光强度可高达3000a.u.，具有优良的荧光性质，并可长期稳定的存在于各种溶液及极端pH等情况下。NapA-AuNCs及AuNCs均可穿透人工气道粘液模拟物，并可快速穿透小鼠气道。<br>　　细胞实验验证NapA-AuNCs具有A549细胞的靶向性，对正常肺上皮细胞毒性极低，可快速进入细胞发出明亮的红色荧光，2-8小时就可以稳定的达到顶峰，并随着时间变化荧光强度逐渐减低，但24小时后仍可见到荧光。NapA-AuNCs可由外周向中心穿透肿瘤组织，体外实验观察到4小时就可以穿透到肿瘤中心，有良好的穿透性。<br>　　动物实验证明了NapA-AuNCs可靶向作用到肺腺癌组织内，较非靶向的AuNCs荧光更强。NapA-AuNCs可以有效的定位肺腺癌组织中，甚至可以荧光识别极小、临床不好辨别的肺腺癌结节。气道给药较静脉给药方式对肺腺癌组织荧光显像更快，非靶器官蓄积更少。NapA-AuNCs半衰期较长，主要是通过肝脏、肾脏代谢，通过胆汁、尿液排出体外，且肝、肾毒性及肺脏影响很低。<br>　　研究结论：<br>　　AuNCs外包被NapsinA抗体可以提高肺腺癌靶向性，选择性的在肺腺癌中蓄积增加。气道给药是一种安全、有效、迅速的肺腺癌术中定位方式，这种操作简单、无创、靶向、快速、低毒的定位方式可以为肺腺癌术中定位提供更优的选择策略，有较好的临床应用前景。