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摘要目的和意义目的：1、确定阳性药（二甲双胍Metformin，Met和依替膦酸二钠EtidronateDisodiumTablets，ED）、积雪草苷（Asiaticoside，AS）、益母草碱（Leonurine，SCM）和黄精多糖（Polygonatumsibiricum，SR）组合物（以下简称AS+SCM+SR组合物）对斑马鱼的量-毒关系。2、利用无毒剂量的链脲佐菌素（Streptozocin，STZ）预处理，建立斑马鱼成鱼Ⅱ型糖尿病模型，利用STZ和泼尼松龙（Prednisolone，PN）预处理，建立斑马鱼幼鱼Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松模型；比较各个浓度AS+SCM+SR组合物对治疗Ⅱ型糖尿病斑马鱼断尾再生或Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松斑马鱼的效果差异；在此基础上探讨AS+SCM+SR组合物对该病症的治疗效果。意义：构建斑马鱼成鱼Ⅱ型糖尿病断尾再生和幼鱼Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松症模型，利用此两种模型评价药物治疗糖尿病足和Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松的活性，对考察AS+SCM+SR组合物的毒性效应具有重要意义，为研究人类骨疾病相关的病理机制和药物对疾病的作用机制提供依据，为寻找治疗糖尿病足和Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松症的新药物和新疗法，提供理论基础。<br>　　方法1、早期发育毒性试验：使用不同浓度的AS+SCM+SR组合物刺激成鱼或2dpf（daypostfertilization）的斑马鱼鱼卵，观察斑马鱼的发育情况。2、对成鱼进行腹腔注射，对2dpf斑马鱼鱼卵进行显微注射，建立Ⅱ型糖尿病模型，培养至4dpf。3、对成鱼进行断尾处理，分组观察尾鳍再生的长度，对4dpf斑马鱼幼鱼，在Ⅱ型糖尿病模型基础上建立骨质疏松模型，进行茜素红骨骼染色并用专业仪器分析相关指标。4、qRT-PCR检测并观察药物对尾鳍再生相关基因Osterix、IL-1b、Mmp9和破骨细胞相关基因CTSK、TRAP、NFATC-1的mRNA表达水平的影响。<br>　　结果1、AS+SCM+SR组合物给药后，毒性随着浓度的增大而增大，成鱼发生死亡，幼鱼出现了不同程度地色素沉着、心包囊肿和卵黄囊肿大，形态发生异常并呈现出剂量依赖性的趋势。2、正常组成鱼血糖值是56.87mg/dL，模型组是257.18mg/dL，正常组幼鱼血糖值是1.063nmol/尾，模型组是3.457nmol/尾，正常组的骨矿化面积27272，IOD是6400.67，模型组的骨矿化面积2727.13，累计光密度IOD是681.42，两者存在显著性差异，证明造模成功。3、整体而言，各浓度组均能明显改善糖尿病足或Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松症。4、AS+SCM+SR组合物给药治疗后，Osterix和Mmp9的表达水平上调，IL-1b的表达水平下调，而CTSK、TRAP、NFATC-1的mRNA表达水平均下调。<br>　　结论1、选择适龄成鱼或2dpf斑马鱼胚胎，采用显微注射方式，建立Ⅱ型糖尿病模型，针对幼鱼，在4dpf时，采用浸泡给药PN的方式，可以建立Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松模型；在EVOS成像系统下观察斑马鱼成鱼尾鳍再生的情况和幼鱼形态变化以及骨骼茜素红染色，这些可作为筛选治疗糖尿病足和Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松症药物的参考指标。2、AS+SCM+SR组合物的作用机制可能与促进Osterix和Mmp9的表达，促进骨骼组织中活跃的矿化作用，进而加快骨形成和重建过程有关，而下调了IL-1b的表达量，抑制了慢性炎症反应。同时破骨细胞相关基因CTSK、TRAP、NFATC-1表达量均下调，抑制了破骨细胞分化，改善骨质疏松症状。AS+SCM+SR组合物可作为进一步研究治疗糖尿病足和Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松症的候选药物，为糖尿病足和Ⅱ型糖尿病合并骨质疏松症的合理用药与治疗提供理论依据。