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摘要目的：<br>　　淋巴结转移是影响下咽鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素，也是其治疗失败的主要原因之一。本研究根据前期的基因组学测序，结合临床病理分析筛选出促进下咽鳞状细胞癌淋巴结转移的关键基因HSP90AA1。并对HSP90AA1基因在下咽鳞状细胞癌中的表达、对淋巴结转移的影响及其调控机制进行深入研究。<br>　　方法：<br>　　根据本课题组前期对伴和不伴淋巴结转移的下咽鳞状细胞癌组织进行转录组测序的结果，筛选出与淋巴结转移显著相关的差异基因HSP90AA1。利用qRT-PCR、Western-blotting和免疫组化染色分别在下咽鳞状细胞癌组织中验证HSP90AA1的表达，并采用Kaplan-Meier生存分析、Log-rank检验和Cox ''s回归分析对下咽鳞状细胞癌患者的临床病理特征进行预后价值分析。利用生物信息学工具进行差异通路分析，探寻HSP90AA1促进下咽鳞状细胞癌淋巴结转移的功能及富集途径，预测HSP90AA1调控下咽鳞状细胞癌淋巴结转移的可能机制。构建慢病毒稳定转染敲低HSP90AA1的FaDu细胞株，利用qRT-PCR分析 HSP90AA1 和 EMT 关键标志物 E-cadherin, N-cadherin, SNAIL,SLUG 及 VIMENTIN的调控关系。利用Transwell侵袭迁移实验、划痕实验，EDU和流式细胞术实验检测敲低HSP90AA1对FaDu细胞功能的影响。构建裸鼠足垫异种成瘤转移模型，移植稳定转染后的FaDu细胞，进行活体荧光成像并观察移植瘤的生长和转移状况。通过对移植瘤及转移淋巴结的测量、免疫组化染色、Western-blotting检测和统计学分析，验证敲低HSP90AA1基因在体内实验中对下咽鳞状细胞癌生长和淋巴结转移的影响，并对HSP90AA1和EMT的调控关系进行探究。<br>　　结果：<br>　　HSP90AA1基因是影响下咽鳞状细胞癌淋巴结转移的关键差异基因之一。通过qRT-PCR、Western-blotting以及免疫组化染色分别验证了HSP90AA1在下咽鳞状细胞癌组织中的表达，发现HSP90AA1在伴淋巴结转移的下咽鳞状细胞癌组织中的表达水平高于不伴淋巴结转移的下咽鳞状细胞癌组织；通过临床病理特征分析和Cox ''s回归分析发现，HSP90AA1的表达水平与下咽鳞状细胞癌的淋巴结转移显著相关，是影响下咽鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素，并且可能是预测下咽鳞状细胞癌患者预后的可靠生物学指标。利用生物信息学工具对TCGA中419例HNSCC样本的转录组数据进行差异通路分析发现， HSP90AA1可能通过调控E-cadherin的编码基因CDH1改变细胞骨架影响肿瘤细胞极性，进而增强肿瘤细胞的侵袭和迁移能力。通过慢病毒感染构建稳定转染的敲低HSP90AA1的下咽癌FaDu细胞株开展体外细胞实验，实验结果显示敲低HSP90AA1能显著抑制FaDu细胞的增殖、侵袭和迁移，并能促进FaDu细胞凋亡。并且随着HSP90AA1表达的下调， EMT上皮标志物E-cadherin表达上调，而间质标志物N-cadherin, SNAIL, SLUG 及 VINMENTIN表达下调，提示HSP90AA1与EMT之间存在调控关系。通过构建裸鼠足垫异种成瘤转移模型开展分组体内动物实验，对两组裸鼠的移植瘤和转移淋巴结进行测量、免疫组化染色、Western blotting 检测和统计学分析，实验结果显示HSP90AA1表达下调能显著抑制下咽鳞状细胞癌的生长和淋巴转移，同时，HSP90AA1的表达水平与E-cadherin负相关而与SNAIL正相关，这个结果同样证实了HSP90AA1对EMT的调控作用。<br>　　结论：<br>　　由于下咽鳞状细胞癌发生部位喉咽区域的解剖特性，下咽鳞状细胞癌容易发生淋巴结转移，而淋巴结转移则会极大的降低下咽鳞状细胞癌患者的预后，HSP90AA1的表达上调更会增加这个风险。在本研究中，我们以HSP90AA1为目标，验证了其在下咽鳞状细胞癌组织中的表达，并发现了其对下咽鳞状细胞癌的预后价值。同时，HSP90AA1可能通过E-cadherin的编码基因CDH1调控EMT，改变细胞骨架和细胞极性，降低细胞粘附性，增强其侵袭和迁移能力，从而促进下咽鳞状细胞癌细胞进入淋巴管进而发生淋巴结的转移。本研究虽然具有一定的局限性，但相信经过更深入的研究，HSP90AA1有望成为预测下咽鳞状细胞癌预后和淋巴结转移风险的可靠生物标志物和治疗下咽鳞状细胞癌治疗的新的生物学靶点。