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RAB3B对早发型子痫前期中滋养细胞功能的影响及其机制研究

摘要背景和目的:早发型子痫前期(EOPE)是发生于妊娠20周之后的高血压疾病,主要由滋养细胞功能障碍以及螺旋动脉重塑不足引起,其具体发病机制至今仍不清楚。而高通量测序技术的发展为我们找到更多与子痫前期发病相关的分子提供了可能。<br>  方法:通过分析EOPE测序数据,找到差异表达基因。收集EOPE患者(n=20)以及匹配孕周的对照(n=20)的胎盘绒毛组织,通过RT-qPCR对差异表达基因进行验证,筛选差异表达基因。利用组织免疫荧光、免疫组织化学、Western blot 明确 RAB3B 在胎盘组织中的定位以及在EOPE胎盘中的表达水平。采用慢病毒感染或小干扰RNA转染对滋养细胞进行 RAB3B 的过表达或敲降;用 Western blot、transwell、细胞划痕检测各组细胞的侵袭以及迁移能力;EdU、流式细胞用于检测滋养细胞的增殖以及凋亡能力;采用管腔形成实验检测滋养细胞的成管能力。利用转录组测序、RT-qPCR、 Western blot、细胞免疫荧光、管腔形成实验探究RAB3B的下游调控机制。通过构建EOPE小鼠模型探究了小鼠胎盘中Rab3b与EOPE的关系。<br>  结果:转录组测序、组织免疫荧光、Western blot 结果显示 RAB3B在胎盘绒毛滋养细胞中表达且在 EOPE 胎盘中表达水平显著下降。增殖以及凋亡实验结果表明 RAB3B 的表达下降不会影响滋养细胞的增殖和凋亡。Transwell、划痕实验表明RAB3B的下调促进滋养细胞的侵袭迁移能力。管腔形成实验结果显示RAB3B的下调抑制滋养细胞的成管能力。转录组测序结果提示 RAB3B 的下调影响 enEVT 分化相关marker。Western blot、RT-qPCR、细胞免疫荧光、管腔形成实验结果显示,RAB3B通过影响TGFβ通路中SMAD3的表达进而调控enEVT分化,并且TGFβ2为RAB3B的上游调控分子。小鼠体内实验证明Rab3b与EOPE的发病有关。<br>  结论:RAB3B的下调引起TGFβ通路中SMAD3的总蛋白以及磷酸化水平下降,从而导致enEVT分化相关marker表达下降,造成enEVT分化受阻,最终造成EOPE。而EOPE外周血中TGFβ2的异常上调或许是导致RAB3B表达下调的原因之一。

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