摘要心力衰竭(Heart failure, HF),简称心衰,是指各种原因导致心脏泵血功能受损,心排血量无法满足全身组织基本代谢需要的综合征。心力衰竭的发病率和死亡率极高。心衰时心室壁压力增加会刺激脑钠肽(Brain natriuretic peptide, BNP)的分泌,可以通过检测BNP的含量来实现心衰的早期诊断。常用于检测BNP的方法有化学发光免疫分析法(Chemiluminescence immunoassay, CLIA)、酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和测流免疫分析法(Lateral flow immunoassay, LFIA)。以上均是利用抗原抗体特异性结合反应检测BNP的免疫分析法,检测时可能发生交叉反应,存在竞争相同抗原结合部位的情况,因此对抗体特异性要求较高。<br> 本文基于钯纳米片(Palladium nanoshees,Pd NSs)开发了一种用于BNP超灵敏检测的荧光新方法。将Pd NSs作为能量受体,荧光染料Cy5.5作为能量供体修饰在可以特异性识别BNP的核酸适配体(Cy5.5-apt)上。Cy5.5-apt吸附在Pd NSs表面,当二者距离接近时,通过荧光共振能量转移( Fluorescence resonance energy transfer , FRET)荧光被猝灭。当检测体系中存在待测物BNP时,Cy5.5-apt与BNP特异性结合后脱离Pd NSs,二者距离拉远时,荧光恢复,且荧光恢复强度与BNP浓度成正比。基于以上原理构建了用于超灵敏检测BNP的荧光新方法。该方法对BNP的检测范围为50?10000 fg/mL,检出限为45 fg/mL。该方法具有良好的选择性和抗干扰性,血清中的加标回收率为95.10?120.9%。使用本方法对57例临床血样中BNP含量进行检测,检测结果与临床常用的化学发光法的检测结果具有较强相关性( r=0.86 )。通过绘制受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)分析两种方法的诊断性能。本方法的阳性预测率(62.5%vs 33.3%)及特异度(94.2%vs 80.8%)较CLIA法高,表明本方法的误诊率更低。<br> 临床血样保存不当时会导致BNP加速降解,从而引起检测误差,而体内检测可以有效避免该情况发生。因此,我们通过阿霉素诱导并构建了不同周期(2?8周)的心衰小鼠模型,并通过电感耦合等离子体-质谱法(Inductively coupled plasma-mass spectrometry, ICP-MS)检测该复合纳米探针在小鼠体内分布的情况。我们发现,该复合纳米探针主要分布于小鼠的肝脏,其次是心脏和肾,脑中最少。并且,该复合纳米探针在心衰小鼠各组织内的含量比健康小鼠高。心衰小鼠体内BNP的含量较健康小鼠高,该复合纳米探针识别BNP后在相应的组织中分布增多,表明该复合纳米探针具有一定体内检测BNP的潜力。
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