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摘要研究背景与目的<br>　　乳腺是哺乳动物的一个复杂的外分泌腺体，是一个出生后才逐渐完成发育过程的器官。乳腺导管主要由内层的腔上皮细胞和外层的肌上皮细胞组成。乳腺发育的各个阶段都需要众多转录因子的调控。目前对乳腺发育及乳腺干细胞的研究已经取得了巨大的进展，乳腺上皮细胞的分化等级模式成为研究的新焦点。然而对于各个细胞种类的命运决定却知之甚少。同时，每种细胞来源的乳腺肿瘤表现出截然不同的病理特征和预后效果，研究各种细胞的命运决定不仅可以解释乳腺上皮细胞的分化等级模式，更有助于研究如何预防和治疗乳腺癌。<br>　　细胞命运最终由转录因子决定。基于CRISPR/dCas9系统的染色质免疫共沉淀技术，我们称作基因编辑的DNA结合分子介导的免疫共沉淀技术（enChIP技术)。通过enChIP技术结合下游的蛋白质组学分析，可以检测到多种与染色质相互作用的蛋白质，是现代研究启动子与转录因子相互作用的有效方法。本研究着眼于乳腺上皮细胞谱系的形成过程，我们利用基于CRISPR/dCas9系统的enChIP技术，希望找到一系列可以调控乳腺上皮细胞命运的转录因子，为研究影响乳腺上皮细胞分化的转录因子调控网络以及治疗乳腺癌的策略提供新思路。<br>　　方法和结果<br>　　在本研究中，我们利用enChIP技术，设计靶向定位到肌上皮细胞特异蛋白CK5启动子和腔上皮细胞特异蛋白CK8启动子的向导RNA，并通过染色质免疫共沉淀技术验证了特异性的向导RNA确实靶向定位到krt5启动子或者krt8启动子，确保了Cas9蛋白定位的准确性。我们通过ChIP-质谱分析找到了一系列与乳腺上皮细胞命运相关的转录因子（包括Stk38，NF-κB通路蛋白，Prdm1，Mga等）。随后我们根据ChIP-qPCR和人乳腺石蜡切片免疫荧光结果进一步验证Stk38，NF-κB通路蛋白RelA，Prdm1，Mga在乳腺上皮细胞的富集及表达情况。我们采取RT-PCR，细胞免疫荧光染色技术和Nano-Glo双荧光素酶实验探索转录因子对乳腺上皮细胞功能的调控作用，实验结果表明Stk38和RelA促进CK5的表达，抑制CK8的表达；而Prdm1和Mga促进CK8的表达，抑制CK5的表达。<br>　　结论<br>　　通过本研究我们发现Stk38和RelA可以促进肌上皮细胞表型并抑制腔上皮细胞表型表型；Prdm1可以促进腔上皮细胞表型并抑制肌上皮细胞表型。我们发现Mga主要在乳腺组织的腔上皮细胞中表达，促进腔上皮细胞表型并抑制肌上皮细胞表型。