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摘要目的：脓毒症是临床最为常见的急危重症之一，后期常常出现免疫抑制，并继发致命性病原体感染，死亡率居高不下。重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,GM-CSF）具有免疫调节作用，成为脓毒症免疫治疗的重要研究内容。本文旨在研究重组GM-CSF对脓毒症小鼠、健康人及脓毒症患者外周血多形核中性粒细胞（polymorphonuclearneutrophils,PMNs）杀菌能力的影响，评估其对脓毒症小鼠继发性肺炎预后的影响及其相关机制，为重组GM-CSF在临床脓毒症中的应用提供理论基础。<br>　　方法：1.采用盲肠结扎穿孔术（cecalligationandpuncture,CLP）构建C57BL/6J小鼠脓毒症模型，通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜，检测小鼠出现免疫抑制后，使用重组GM-CSF在体干预前后，评估外周血PMNsCD11b表达、氧爆发、吞噬及中性粒细胞外陷阱释放（neutrophilextracellulartraps,NETs）的差异；2.CLP小鼠在重组GM-CSF干预后，通过气管内注射不同浓度铜绿假单胞菌液，诱导脓毒症后不同严重程度的继发性肺炎模型，观察干预组与对照组小鼠生存差异；3.结合重组GM-CSF在体干预前后，小鼠外周血PMNs全转录组学测序及生物信息学分析筛选结果，使用Percoll密度梯度离心法，分离临床脓毒症患者外周血PMNs，进行重组人GM-CSF体外培养，通过荧光定量PCR、流式细胞术、荧光酶标技术及激光共聚焦显微镜，再次检测PMNs杀菌能力差异及胞内白细胞介素-1β（interleukin-1beta,IL-1β）浓度变化，以探讨重组GM-CSF对PMNs的影响及其作用机制。<br>　　结果：1.与假手术相比，CLP小鼠生存、体重、临床评分，血清及腹水中肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactoralpha,TNF-α）、IL-1β均有显著性差异；其中CLP5天后出现免疫抑制，具体表现为骨髓及脾脏中T、B淋巴细胞比例减少，骨髓及外周血单核细胞主要组织相容性复合体-II类分子（majorhistocompatibilitycomplexclassII,MHC-II）表达下降，同时发现外周血PMNsCD11b的表达、活性氧爆发（reactiveoxygenspecies，ROS）及吞噬能力下降。2.直视下气管内注射铜绿假单胞菌可以稳定构建肺炎模型，小鼠肺部渗出明显且足以导致小鼠死亡；重组小鼠GM-CSF（recombinantmouseGM-CSF,rmGM-CSF）干预可显著改善继发性肺炎生存，在5×107cfu及1×107cfu菌液剂量的肺炎中生存差异更为明显；气管内接种菌液48小时后取小鼠肺部病理进行切片染色，可见GM-CSF干预小鼠肺间质及肺泡内渗出较NS对照小鼠肺部病变减轻；肺泡灌洗液进行细菌培养发现，干预组小鼠菌落数较对照组减少；在亚致死菌液剂量（5×105cfu）诱导肺炎早期（6小时），干预组小鼠肺泡灌洗液较对照组小鼠表现出更高浓度的TNF-α及IL-1β。3.rmGM-CSF干预后，小鼠外周血白细胞计数及外周血白细胞表面MHC-II分子显著性增加；干预小鼠骨髓及外周血单核细胞比例和MHC-II分子表达均增加；干预小鼠外周血PMNsCD11b表达、氧爆发、吞噬能力及NETs释放增强；加用抗rmGM-CSF单克隆抗体可显著性降低外周血PMNsCD11b表达、氧爆发及吞噬能力。4.Percoll分离健康志愿者及脓毒症患者外周血PMNs体外配对使用重组人GM-CSF（recombinanthumanGM-CSF,rhGM-CSF）干预，与对照组相比，PMNs的CD11b表达、氧爆发、吞噬及NETs释放均有增加；激光共聚焦显微镜下可见PMNs胞外以DNA为骨架附着有组蛋白和髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）的NETs形成；体外加入抗rhGM-CSF单克隆抗体后，重复检测PMNs的CD11b表达、氧爆发、吞噬及NETs释放均低于GM-CSF干预的PMNs。5.小鼠外周血PMNs全转录组学生信分析发现，经过rmGM-CSF干预后IL-1β基因表达有上调；qPCR证实rmGM-CSF干预可显著上调小鼠Il1b基因的转录；与NS对照小鼠比，rmGM-CSF干预小鼠的PMNs能够被脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激诱导生成更多的IL-1β；分离脓毒症患者PMNs，配对分组比较发现体外rhGM-CSF干预可同样提高IL1B基因的表达；GM-CSF干预PMNs可使细胞内生成更多的IL-1β前体，受到LPS刺激的PMNs能够释放更多的IL-1β成熟体；加入半胱天冬酶-1（Caspase-1）抑制剂Ac-YVAD-cmk可减少IL-1β剪切活化；Ac-YVAD-cmk可减少PMNs氧爆发、吞噬及NETs释放，但对CD11b的表达并无影响。<br>　　结论：1.CLP诱导构建鼠类脓毒症模型5天后可出现以单核细胞表面MHC-II蛋白表达下降为代表的免疫抑制及PMNs杀菌功能异常，重组GM-CSF可改善脓毒症后继发性肺炎的生存率。2.重组GM-CSF可显著改善脓毒症所致的免疫抑制小鼠单核细胞MHC-II的表达及PMNs的杀菌功能。3.重组GM-CSF可通过增加脓毒症PMNs胞内IL-1β的前体储备，强化PMNs的杀菌能力。