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摘要目的：<br>　　1.监测中山口岸4个港区（中山、神湾、小榄和黄圃港区）的鼠形动物种类，调查其携带体表寄生虫和自然感染鼠类病原体的情况。<br>　　2.对比和选择能够同时获得病媒生物DNA、RNA的核酸提取方式，建立一种能够同时对病媒生物进行种类鉴定及病原微生物检测的方法，为口岸病媒生物快速检测提供参考。<br>　　3.了解蚊类、蜚蠊、蝇类、鼠形动物四大类病媒生物所携带微生物的群落组成（致病/条件致病微生物）。<br>　　方法：<br>　　1.2020年5月~2022年5月在中山口岸4个港区使用笼夜法捕捉鼠形动物，采集其体表寄生虫并提取核酸，然后解剖取肝、脾、肺、肾4种器官的组织提取核酸，通过PCR法分别对鼠形动物及其体表寄生虫进行物种鉴定；参照国境口岸检测鼠类病原体的行业标准检测捕获鼠形动物鼠疫耶尔森菌、汉坦病毒、致病性钩端螺旋体、巴尔通体、土拉弗朗西斯菌的感染情况。<br>　　2.在中山市各采样点采集蚊、蜚蠊、鼠形动物、蝇四类病媒生物样本并进行形态学鉴定；使用Trizol法、吸附柱法和磁珠法对蚊类样品进行DNA、RNA共同提取，并测定其浓度和纯度，通过统计学比较，选择出最佳的核酸提取方法。<br>　　3.选择上述探索的最佳方法提取蚊类、蜚蠊、蝇类以及鼠形动物的核酸，使用PCR法进行种类鉴定，并对蚊、鼠形动物样品进行病原体检测。再通过宏基因组测序对上述病媒生物样品进行种类鉴定和微生物检测，并对测序结果进行α多样性分析以及微生物群落组成分析；使用Kappa分析评估PCR法和宏基因组测序法物种鉴定结果一致性。<br>　　结果：<br>　　1.2020年5月~2022年5月，在中山口岸4个港区内共捕获鼠形动物48只，平均密度为2.94%；共检出体表寄生虫34只，分别为虱17只，螨12只，蚤4只，蜱1只，鼠形动物染虱率10.00%、染螨率14.58%、染蚤率4.17%、染蜱率2.08%，4个港区中，黄圃港区鼠形动物染虫率最高，为25.00%。共10只鼠形动物感染巴尔通体，总阳性率为20.83%；捕获3种鼠形动物中均检出巴尔通体阳性，其中黄胸鼠检出率最高，为50.00%；通过一代测序法在10条巴尔通体阳性序列中有4条序列分别鉴定为Bartonellatribocorum、Bartonellaqueenslandensis、Bartonellaphoceensis，同时，鼠疫杆菌、汉坦病毒、土拉弗朗西斯菌及致病性钩端螺旋体均未在鼠形动物中检出。此外，通过宏基因组测序，有2条巴尔通体序列鉴定为Bartonellatribocorum，且在1只黄胸鼠中检出致病性钩端螺旋体。<br>　　2.共采集到媒介昆虫2219只，经形态学鉴定隶属于2目5科16属，其中，蚊类样本共鉴定到3种，分别为白纹伊蚊、致倦库蚊、骚扰阿蚊，其中白纹伊蚊的数量最多，达到2053只；蜚蠊样品共鉴定到10种，分别为美洲大蠊、拟德国小蠊、双纹小蠊、金边地鳖等，蝇类样品共鉴定到10种，其中麻蝇最多，为154只。3种核酸共提取方法中，吸附柱法提取得到的DNA浓度及纯度均最高，分别达到19.84±11.59ng/μL和1.78±0.32。<br>　　3.通过对蚊、蜚蠊、鼠形动物和蝇四大类病媒生物样品多样性指数（shannon和simpson）和丰富度指数（obs和chao）进行分析，结果表明，蝇类多样性指数和丰富度指数值均为最大，鼠形动物多样性指数和丰富度指数值均为最小，且差异均具有统计学意义（Plt;0.05），提示不同病媒生物携带微生物多样性和丰富度可能不同。其中，在蚊类样品中，骚扰阿蚊simpson指数值最小，与致倦库蚊相比，差异具有统计学意义（Plt;0.05）；在蜚蠊样品中，美洲大蠊多样性指数和丰富度指数值均最大，且与其他种类相比，差异具有统计学意义（Plt;0.05）；在鼠形动物样品中，各类样品的多样性和丰富度指数差异均无统计学意义（Pgt;0.05）；在蝇类样品中，各类样品间多样性指数差异均无统计学意义，但短角亚麻蝇丰富度指数与大头金蝇和家蝇相比，差异具有统计学意义（Plt;0.05）。此外，对一代测序与宏基因组测序病媒生物种类鉴定结果进行一致性分析，Kappa值为0.429，P=0.007，表明两种鉴定方法具有一致性。<br>　　4.通过宏基因组测序，鉴定出蚊、蜚蠊、鼠、蝇携带的细菌种类分别有19、173、5、479种。其中，在蚊类样品中，白纹伊蚊获得细菌数最多，共16种；在蜚蠊样品中，美洲大蠊获得细菌数最多，共136种；在鼠形动物样品中，褐家鼠仅检测到1种特有细菌，臭鼩与黄胸鼠共有1种细菌；在蝇类样品中，酱亚麻蝇获得细菌数最多，共293种。同时，宏基因组测序能够检出包含蚊媒病毒基因片段的质粒序列（黄热病毒、寨卡病毒等），表明该技术能用于病媒生物携带病原微生物检测。此外，本研究还发现，致倦库蚊、骚扰阿蚊样品未检出致病/条件致病菌，但其他样品中均有检出。<br>　　结论：<br>　　通过对2020年5月~2022年5月中山口岸各港区鼠形动物的监测，发现臭鼩和黄胸鼠为优势种；鼠形动物携带体表寄生虫中，螨的携带率在褐家鼠中最高，且巴尔通体为鼠形动物感染最主要的病原体。通过对蚊类样品核酸提取方法的比对，发现吸附柱法法提取得到的核酸浓度和纯度最优。通过宏基因组测序发现，蝇类携带细菌种类最多，鼠形动物携带细菌种类最少；蚊类和蜚蠊样品携带的优势菌分别为沃尔巴克氏菌和蜚蠊共生菌，此外，美洲大蠊和酱亚麻蝇携带致病/条件致病菌数量最多；在病媒生物种类鉴定方面，宏基因组测序与一代测序具有一致性，同时，宏基因组测序能够对含多种病媒生物的样品进行种类鉴定。