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基于MAPK/iPLA(2)γ信号传导通路探讨芪地固肾方对特发性膜性肾病大鼠的干预作用

摘要目的:<br>  1.观察特发性膜性肾病(IMN)模型大鼠24h尿蛋白定量(U-TP)、血清生化及肾脏病理情况等,明确芪地固肾方对IMN模型大鼠的疗效。<br>  2.观察芪地固肾方对IMN大鼠肾组织中MAPK/iPLA(2)γ信号传导通路活化的影响,进一步探索芪地固肾方治疗IMN的效应机制。<br>  方法:<br>  本实验建立被动Heymann肾炎IMN大鼠模型,取健康雄性SD大鼠75只,预留空白组10只,余造膜成功后随机分为模型组、贝那普利组、芪地固肾方低剂量、中剂量、高剂量组(以下简称中药低、中、高剂量组),共6组。各给药组分别采取相应药物混悬液灌胃,空白组及模型组则予等量双纯水灌胃,共4周。动态观察大鼠24hU-TP及给药后血清白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)水平,PAS、Masson染色及电镜观察大鼠肾脏病理改变,RT-PCR检测肾组织中P38、ERK、iPLA(2)γ的表达水平;WB检测肾组织中P38、P-P38、ERK的表达水平;免疫组化检测肾组织中iPLA(2)γ的表达水平。<br>  结果:<br>  1.24h尿蛋白定量:造模前各组无差异,具有可比性;造模后各组尿蛋白均高于空白组(P<0.01);给药2周后,各给药组尿蛋白虽有所下降,但仍显著高于空白组(P<0.01),与模型组比较无差异(P>0.05);给药4周后,贝那普利组及中药中、高剂量组尿蛋白较模型组明显降低(P<0.01);中药低剂量组尿蛋白与贝那普利组比较有差异(P<0.05)。<br>  2.血清白蛋白、总蛋白:较空白组,模型组TP、ALB显著降低(P<0.01);较模型组,中药中、高剂量以及贝那普利组TP、ALB显著升高(P<0.01)。<br>  3.甘油三酯、总胆固醇:较空白组,模型组TC、TG显著升高(P<0.01);与模型组相较,贝那普利组、中药中、高剂量组TC显著降低(P<0.01),各给药组TG均有显著差异(P<0.01)。<br>  4.肾组织病理形态:光镜检查:模型组肾小球基底膜弥漫性增厚,MASSON染色可见上皮下嗜复红蛋白沉积,余四组基底膜均有病理改变。给药后,与模型组比较,中药中、高剂量及贝那普利组改善明显,基底膜轻度局部增厚,MASSON染色可见少量嗜复红蛋白沉积。中药低剂量组病变改善不明显。电镜检查:模型组基底膜弥漫性增厚,上皮下电子致密物沉积,足突广泛融合,内皮细胞肿胀。给药后,与模型组比较,中药中、高剂量及贝那普利组病变改善明显,可见基底膜轻度不均匀增厚,足突节段性融合;中药低剂量组改善不明显。<br>  5.RT-PCR检测P38、ERK、iPLA(2)γ基因相对表达:较空白组,模型组P38、ERK、iPLA(2)γ明显增高(P<0.01);较模型组,贝那普利组、中药中、高剂量组P38、ERK、iPLA(2)γ表达显著降低(P<0.01),中药低剂量组P38、iPLA(2)γ表达有变化(P<0.05)。<br>  6.WB检测P38、P-P38、ERK蛋白相对表达:与空白组比较,模型组P38、P-P38、ERK表达均有显著差异(P<0.01);与模型组比较,贝那普利组、中药中剂量组P38、ERK表达显著差异(P<0.01),中药高剂量组P38表达有差异(P<0.05),贝那普利组、中药高剂量组P-P38表达有显著差异(P<0.01)。<br>  7.免疫组化检测iPLA(2)γ蛋白相对表达:与空白组比较,模型组iPLA(2)γ表达有显著差异(P<0.01);与模型组比较,贝那普利组、中药低、中剂量组均有显著差异(P<0.01),中药高剂量组有差异(P<0.05)。<br>  结论:<br>  1.芪地固肾方能降低IMN大鼠24hU-TP、提升ALB、TP,调节脂代谢,减轻肾脏病理损伤。<br>  2.芪地固肾方可能通过调控MAPK/iPLA(2)γ信号传导通路,减少足细胞损伤,降低蛋白尿,缓解IMN发展进程。

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导师 雷根平
学位信息:
陕西中医药大学 中医学 中医内科学(硕士) 2023年
分类号 R256.5
发布时间 2024-07-05
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