摘要蛋白质N末端乙酰化修饰是一种广泛存在于真核生物中的蛋白质共翻译修饰形式。N末端乙酰化在蛋白质功能调控中发挥关键作用,并在维持生物体的正常生命活动中具有重要意义。前期研究中发现NatE的催化亚基Naa50功能缺失会造成拟南芥产生发育缺陷的表型。在本文中,基于naa50-1突变体表现出主根变短以及叶片皱缩的表型,我们进一步对Naa50的生物学功能以及可能作用的机制进行探讨,获得如下结果:<br> 1.通过对拟南芥根细胞形态观察,发现naa50-1突变体相较于野生型表现出主根分生区细胞排列无序,细胞形态不一致,且细胞核呈现出形状、大小不均等的形态;表明Naa50功能缺失导致染色体异常分裂,进而影响遗传物质的均等分配,导致主根变短。<br> 2.通过比较野生型与naa50-1突变体中根尖分生区细胞的染色体分离行为,发现naa50-1突变体根尖分生区细胞有丝分裂率显著低于野生型,且处在中期的细胞比例相较于野生型明显增加;表明Naa50对细胞分裂期间遗传物质的平均分配发挥重要作用,同时促进细胞分裂从中期向后期转变。<br> 3.通过观察野生型与naa50-1突变体中根尖分生区细胞的染色体形态,发现naa50-1突变体根尖分生区细胞相较于野生型表现出异常的染色体形态,并且根尖分生区细胞染色体畸变率明显高于野生型;表明Naa50功能缺失导致根尖分生区细胞染色体畸变率增加,进而影响了染色体的正常分离,对细胞分裂期遗传物质的均等分配造成不利影响。<br> 4.利用光学显微镜观察naa50-1突变体背景下含细胞周期蛋白CYCB1-GUS标记情况,对野生型与naa50-1突变体中的CYCB1蛋白表达丰度进行检测,发现naa50-1突变体中CYCB1的蛋白丰度相较于野生型明显增加;表明naa50-1突变体中CYCB1蛋白丰富度的增加可能是由于植物本身的一种反馈响应,进而促进细胞进入分裂期。<br> 5.qRT-PCR检测发现,相较于野生型,naa50突变体中免疫应答标志基因PR1,PR2和PR5的表达明显上调,同时SA合成关键酶ICS1和PBS3明显的上调表达;表明Naa50可能参与调控植物防御反应并调控SA信号通路。<br> 6.通过阻断或降低naa50-1突变体中水杨酸、茉莉酸、脱落酸和油菜素内酯信号,发现阻断水杨酸和茉莉酸的生物合成或者生物合成调控途径可以部分恢复naa50-1突变体莲座叶发育缺陷的表型,而阻断脱落酸和油菜素内酯的生物合成途径或者生物合成调控途径不能恢复naa50-1突变体莲座叶发育缺陷的表型。遗传分析表明,Naa50缺失植株表现出的莲座叶发育缺陷与体内水杨酸、茉莉酸含量增加有关;表明Naa50可能依赖于水杨酸、茉莉酸的信号通路调控植物免疫应答机制。<br> 7.利用邻近标记技术探究拟南芥Naa50的底物蛋白。质谱结果显示,编码R蛋白复合物的RIN4抗病蛋白可能为拟南芥Naa50的底物蛋白。<br> 综上所述,本研究通过对naa50-1突变体进一步的表型分析以及Naa50可能参与的作用机制的研究,我们揭示了拟南芥Naa50参与调控细胞分裂与微管形态建成,影响根的发育;Naa50负调控SA和JA的信号水平,可能参与防御应答机制,影响叶片的发育;RIN4可能为Naa50的底物蛋白。
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