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摘要轮状病毒是常见经“粪-口”途径传播的肠道致腹泻病原之一，主要感染婴幼儿和幼龄动物，以腹泻为主要临床症状，对人类公共卫生安全和动物健康造成巨大威胁。本研究旨在了解我国西北地区某羊场羊轮状病毒感染情况，分离鉴定毒株，解析毒株分子特征，并分析其对乳鼠的致病性。<br>　　采集某羊场13份腹泻羔羊肛拭子样本，基于轮状病毒VP6基因，采用RT-PCR检测方法，发现轮状病毒阳性率为15.38%（2/13）。阳性羊的肠道组织经组织病理学观察可见，肠道黏膜上皮细胞可见坏死、脱落，固有层肠腺坏死；免疫组化染色可见肠道肠绒毛顶端存在大量轮状病毒抗原。将一份轮状病毒阳性样本经MA-104细胞传代，至第8、9和10代12h可见细胞变圆、大面积脱落和细胞出现拉丝状等明显细胞病变。采用RT-PCR检测每次传代后的病毒液，均能检测出轮状病毒VP6基因的特异性条带，经测序分析均为轮状病毒。间接免疫荧光检测可见感染分离毒株的MA-104细胞出现大量特异性绿色荧光。透射电子显微镜下可见直径为70~80nm，形似“车轮状”的病毒粒子。结果提示，成功分离鉴定1株绵羊源轮状病毒，将分离毒株命名为GS2023。<br>　　对轮状病毒GS2023分离株进行全基因组测序，经序列分析比对，发现该分离毒株的基因型为G6-P[1]-I2-R2-C2-M2-A11-N2-T6-E2-H3；该分离毒株的11段基因组序列已上传至NCBI数据库中，登录号为PP115426~PP115436。该分离毒株的基因组序列与我国兰州、北京和武汉的羔羊源轮状病毒LLR、Lamb-NT和CC0812-1毒株相比，其VP4、VP7和NSP3基因型存在差异，而与乌干达山羊源RVA/Goat-wt/UGA/BUW-14-085/2014/G6P[1]毒株和孟加拉国山羊源GO34毒株的11个基因片段的基因型相一致。系统发育进化树结果发现，分离毒株与我国人源、牛源和羊源的轮状病毒具有共同的起源，存在跨物种传播的风险。<br>　　动物感染试验发现，7日龄SPF级BALB/c乳鼠口服分离毒株后，从第1d开始发生腹泻，持续3d，从第4d开始腹泻症状明显好转；攻毒后第1d至第3d时，试验组和对照组乳鼠体重无显著差异（p＞0.05），第4d和第5d时，对照组乳鼠平均体重显著高于试验组（p＜0.05）。RT-qPCR定量检测乳鼠粪便中轮状病毒载量发现，试验组乳鼠攻毒后第1d时病毒载量较高，随后下降，第5d时病毒载量接近阴性；对照组乳鼠粪便均呈轮状病毒阴性。组织病理学观察可见，试验组乳鼠十二指肠相可见大量肠绒毛上皮与固有层分离，空肠可见大量的上皮细胞胞质空泡化，回肠可见大量肠绒毛空泡，胞核被挤向一侧。结果提示，轮状病毒GS2023分离株可引起乳鼠明显腹泻，抑制其体重增长。<br>　　综上所述，本研究成功分离鉴定1株绵羊源轮状病毒，该分离毒株可引起乳鼠腹泻，具有一定的致病性。研究结果为进一步研究羊轮状病毒致病机制提供基础材料，也为羊轮状病毒病的流行病学调查和防控奠定基础。