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摘要动物肝纤维化是由各种致病因子导致的肝内结缔组织异常增生，如果给予有效的治疗肝纤维化将会被逆转。研究表明，动物肝纤维化后激活肝细胞自噬可以重建肝脏功能并促进肝脏修复。脂肪干细胞（Adiposestemcells，ADSCs）不仅可以分泌细胞因子，还可以被诱导分化为肝细胞样细胞。研究证实，ADSCs可通过增加肝细胞自噬改善肝纤维化。然而，氧化应激和损伤后动物机体微环境的改变，导致移植后的ADSCs存活率较低。白藜芦醇（Resveratrol，Res）具有抗氧化、抗炎、抗衰老和抗癌作用，可以增加ADSCs的增殖、分化、归巢、生存和抗衰老能力。因此，本实验旨在研究Res预处理的ADSCs是否通过增加肝细胞自噬改善小鼠肝纤维化，并探讨其对自噬通路PI3K/AKT/mTOR表达的影响。内容分三个部分：<br>　　（1）Res预处理ADSCs对BRL-3A细胞的保护作用<br>　　使用不同浓度的Res（0、5、10、20、40、80和100μmol/L）预处理小鼠ADSCs1d，再与6mmol/LCCl4处理1h的BRL-3A共培养24h，检测BRL-3A细胞存活率。CCK8显示Res预处理的ADSCs能够提高BRL-3A细胞活力，20μmol/LRes预处理组BRL-3A的存活率最高（P＜0.01）。血清生化试验结果显示，Res预处理的ADSCs能够改善BRL-3A细胞功能指标AST和ALT表达水平，其中20μmol/LRes预处理组肝细胞功能改善最为明显（P＜0.01）。以上结果说明Res预处理能够提高ADSCs对受损BRL-3A细胞的保护能力，最佳浓度为20μmol/L。<br>　　（2）Res预处理ADSCs调节自噬促进小鼠肝纤维化的修复<br>　　将50只小鼠随机分为5组（对照组、CCl4组、ADSCs组、Res+ADSCs和3-MA组）。小鼠肝纤维化模型采用20%CCl4，2ml/kg·bw，每周2次，连续6周。第7周开始，小鼠尾静脉注射1×106个ADSCs或Res预处理的ADSCs，每周2次，连续2周。8周后，评估Res预处理的ADSCs对小鼠肝纤维化的改善效果，以及肝细胞自噬水平。结果表明，Res预处理的ADSCs治疗后，小鼠肝脏自噬体以及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值和Beclin-1的表达水平显著升高（P＜0.01）。加入3-MA后抑制了自噬水平。HE、Masson、天狼星红和荧光染色结果显示，Res预处理的ADSCs不仅显著降低了肝纤维化小鼠肝脏空泡化、炎性浸润及纤维化面积，还显著抑制了小鼠肝脏中α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β和MMP-2的表达水平上升（P＜0.01），MMP-9的表达水平下降（P＜0.01）。而3-MA组显著降低了Res预处理ADSCs的治疗效果。因此，Res预处理的ADSCs通过增加肝细胞自噬显著减轻了小鼠肝纤维化水平。<br>　　（3）Res预处理ADSCs对BRL-3A细胞PI3K/AKT/mTOR通路的影响<br>　　将BRL-3A细胞分为5组（对照组、CCl4组、ADSCs组、Res+ADSCs组和3-MA组），用6mmol/LCCl4处理BRL-3A细胞（1.5×104）1h后，分别于与3×104个ADSCs或Res预处理的ADSCs共培养，共培养前30min加入750μg/ml3-MA。24h后，收集培养液和细胞，检测自噬情况。WB和qRT-PCR结果表明，Res预处理的ADSCs显著促进了BRL-3A细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值和Beclin-1蛋白和mRNA的表达水平（P＜0.01），加入3-MA后，自噬水平则被抑制（P＜0.01）。生化分析显示，自噬抑制后，也相应的抑制了Res预处理的ADSCs对BRL-3A细胞功能（AST、ALT、ALP和ALB）的保护作用。进一步检测BRL-3A细胞中PI3K/AKT/mTOR通路的表达情况，结果显示与CCl4组相比，Res预处理ADSCs组PI3K、AKT和mTOR的mRNA和蛋白表达量显著降低（P＜0.01）。因此，Res预处理的ADSCs通过增加自噬保护BRL-3A细胞免受损伤可能与抑制了PI3K/AKT/mTOR通路有关。<br>　　综上所述，Res预处理的ADSCs可以通过促进肝细胞自噬修复肝损伤，显著改善小鼠肝纤维化，且自噬的增加可能与抑制了PI3K/AKT/mTOR通路相关。因此，当ADSCs被当作种子细胞治疗动物肝纤维化时，可以考虑用Res进行预处理。