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摘要目的：<br>　　帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是全球发病率第二高的神经退行性疾病（Neurodegenerative diseases，ND）。探索 PD 的发病机制，并找到科学有效的根治方法和手段，仍是当前实验室和临床研究的重点，具有重要的现实意义。外泌体（exosome）是一种可以在细胞间传递遗传物质和蛋白质的细胞外囊泡，其作为细胞间载体具有调节受体细胞活性的作用，并可以在神经退行性疾病中引起错误折叠的蛋白质如α-突触核蛋白（α-Synuclein，α-syn）的迁移。已证实M2型小胶质细胞外泌体可抑制α-syn沉积，减轻神经元损伤，从而缓解PD相关症状，所以本研究首要目的是探讨M2型小胶质细胞外泌体对PD小鼠脑内的神经保护作用及其发挥作用的可能机制。<br>　　Fas受体具有结合配体的细胞外结构域和细胞内死亡结构域（Death domain， DD）。在与其特异性配体FasL结合后形成三聚体，并通过其DD募集含有同源DD的Fas相关死亡结构域蛋白（Fas-associating protein with a novel death domain， FADD），FADD再通过其死亡效应结构域（Death effector domain，DED）募集 pro-caspase-8 结合形成死亡诱导信号复合体（Death-inducing signaling complex，DISC）。DISC可以通过两种机制诱导细胞死亡即经典的caspases途径激活caspase-8诱导细胞凋亡，和受体相互作用蛋白激酶（Receptor-interacting protein kinase，RIPK） 1/RIPK3 信号通路诱导细胞程序性坏死。DISC 作为凋亡和程序性坏死两种途径的交叉点，在PD中具有重要意义。传统观念认为，当细胞凋亡受到抑制时程序性坏死开始被激活。但已经有研究证实，在PD小鼠模型中，程序性坏死和细胞凋亡是可以同时发生的，且通过敲除RIP3/MLKL基因抑制程序性坏死，从而发挥对PD模型脑损伤的保护机制并不受凋亡的影响。因此，本研究第二个目的是探讨M2型小胶质细胞外泌体对PD小鼠脑内神经细胞程序性坏死的影响，并探索其可能机制。<br>　　方法：<br>　　通过脑内注射 6-羟基多巴胺盐酸盐（6-Hydroxydopamine hydrochloride，6-OHDA）建立PD小鼠模型，通过APO旋尾实验和旷场实验观察M2型小胶质细胞BV-2外泌体对PD小鼠运动行为的影响。通过苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin， H＆E）染色检测M2型小胶质细胞BV-2外泌体对PD小鼠脑黑质区神经病理性改变的影响。通过酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）免疫荧光染色检测M2 型小胶质细胞 BV-2 外泌体对 PD 小鼠脑黑质区神经元存活的影响。通过酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测 M2 型小胶质细胞BV-2外泌体对PD小鼠脑黑质区多巴胺（Dopamine，DA）及其在细胞代谢中产生的高香草酸（Homovanillic acid，HVA）和二羟基苯乙酸（Dihydroxypheny-lacetic acid，DOPAC）、5-羟色胺（5-Hydroxytryptamine，5-HT）及其在细胞代谢中产生的5-羟吲哚乙酸（5-Hydroxyindole acetic acid，5-HIAA）的影响。通过原位末端凋亡法（TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL）检测 M2 型小胶质细胞BV-2外泌体对PD小鼠脑黑质区神经元凋亡的影响。通过免疫荧光检测M2型小胶质细胞BV-2外泌体对PD小鼠脑黑质区α-syn沉积的影响。通过免疫印迹试验即Western blot检测M2型小胶质细胞BV-2外泌体对PD小鼠脑黑质区DISC相关蛋白caspase-8、pro-caspase-8、Fas、FasL、FADD及程序性坏死关键蛋白p-RIPK1、RIPK1、p-RIPK3、RIPK3、p-MLKL和MLKL表达的影响。<br>　　结果：<br>　　1.M2型小胶质细胞BV-2外泌体降低6-OHDA诱导的PD小鼠旋尾次数和静止时间，增加小鼠移动总距离和移动速度，改善小鼠脑黑质区神经元形态并增加TH阳性细胞数、DA、DOPAC、HVA、5-HT、5-HIAA含量，减少神经元凋亡以及α-syn沉积，从而改善黑质区神经病理性改变。<br>　　2. M2型小胶质细胞BV-2外泌体下调6-OHDA诱导的PD小鼠黑质内DISC相关蛋白caspase-8、Fas、FasL、FADD及程序性坏死关键蛋白p-RIPK1、p-RIPK3、和p-MLKL的表达。<br>　　结论：<br>　　1. M2 型小胶质细胞外泌体促进 PD 小鼠脑内神经细胞存活并增加神经递质分泌，减少神经元凋亡，减轻PD小鼠的活动障碍，对帕金森病有一定神经保护作用。<br>　　2. M2 型小胶质细胞外泌体可介导 Fas/FasL 信号通路调节 DISC 抑制神经元程序性坏死，发挥神经保护作用。