摘要B细胞淋巴瘤(B-cell lymphoma,BCL)是一种具有高度异质性的血液恶性肿瘤,是成熟B细胞的侵袭性增殖。尽管传统的BCL治疗方法在临床试验中取得了初步成功,但大多数患者最终会产生获得性耐药,临床疗效不佳。表观遗传失调是BCL发病的一个主要因素,最终导致染色质或转录组重塑,并改变基因表达和细胞表型。N6-甲基腺苷(m6A),被确定为最常见、最丰富和最保守的内部转录修饰,尤其在真核信使RNA(mRNA)中,其失调驱动异常转录和翻译程序,并参与包括癌症在内的多种疾病的发病机制。肥胖相关基因(Fat mass and obesity-associated,FTO)作为一种关键的去甲基化酶,通过去除mRNA上m6A残基调节mRNA稳定性。近年来,已报道多种FTO小分子抑制剂,可显著降低肿瘤细胞的自我更新能力,并通过抑制免疫检查点基因的表达重新激活免疫反应。然而,这些表观遗传药物依然存在稳定性差、靶向性弱、耐药等问题,开发新的联合治疗策略实现药物的可控释放是当前急需解决的问题。<br> 金属-有机框架(Metal-organic framework,MOF)具有高比表面积、高孔隙率、可调的孔径以及理想的光物理特性,通过配体到金属的电荷转移机制实现光催化功能,因此被广泛用于设计光敏剂。考虑到光敏剂的声致发光特性,具有光催化属性的MOF材料可能在声动力治疗应用中具有潜力,为此,我们开发了一种基于MOF的“表观纳米声敏剂”,用于BCL的超声驱动级联免疫治疗。通过将 m6A-mRNA 去甲基化酶抑制剂的铜络合物包封到 UiO-66-NH2中构成具有 Z型异质结构(Z-scheme heterostructure)的纳米声敏剂(命名为CuR@UiO66),从而实现超声诱导电子-空穴的有效分离,并产生活性氧(Reactive oxygen species, ROS )。使用磷酸官能化甲氧基聚乙二醇( Phosphate-functionalized methoxy polyethylene glycol,mPEG-PO3)和CD19抗体对声敏剂CuR@UiO66进行表面修饰,制备的CRUPPA19纳米粒子可以特异性地聚集在BCL组织中,甚至可以靶向渗入骨髓的淋巴瘤细胞。CRUPPA19进入细胞后,在超声刺激下诱导细胞内ROS的产生以及细胞凋亡,随后,超声触发自噬促使CRUPPA19降解并释放Cu和 Rhein,从而促进蛋白质的脂酰化和整体 mRNA 甲基化,进而引发铜死亡和PDL1的转录抑制。这种级联效应协同诱导肿瘤细胞免疫原性死亡,促进CD8+T细胞活化,激活抗淋巴瘤免疫反应。CRUPPA19介导的声免疫疗法不仅消除了原发性和转移性淋巴瘤,还清除了骨髓中的淋巴瘤细胞。这种基于MOF的纳米表观遗传治疗平台具有超声触发级联放大功能,增强抗血液肿瘤免疫反应,为治疗BCL提供了新思路。本文主要研究内容如下:<br> (1) 首先制备了 CuRhein 配合物,并对其结构、理化性质进行表征。然后,采用室温两步合成,将CuRhein载入UiO-66-NH2中,获得了MOF基表观纳米声敏剂CuR@UiO66。对CuR@UiO66的形貌、结构、粒径、载药率包封率等进行表征,并通过紫外可见吸收光谱(UV-Vis)、荧光光谱、电子自旋共振光谱(EPR)研究其声敏性。<br> (2) 在CuR@UiO66表面修饰mPEG-PO3和CD19抗体,构建CRUPPA19表观纳米平台,并对其生物相容性、稳定性、药物释放机制进行研究。通过共聚焦激光扫描电子显微镜(CLSM)、流式细胞术、小动物活体光学成像系统(IVIS)等研究CRUPPA19体内外靶向性。<br> (3) 通过蛋白免疫印迹、定量RT-PCR、m6A斑点印迹、流式细胞术、酶联免疫吸附检测(ELISA)等测试方法探究CRUPPA19对A20细胞的作用机制。<br> (4) 通过构建A20淋巴瘤小鼠模型,评估CRUPPA19对BCL的体内抑制效果、生物分布、生物安全性以及免疫激活效果。
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