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摘要研究目的：<br>　　多发性硬化（multiplesclerosis，MS）是免疫介导的中枢神经系统（centralnervoussystem，CNS）炎性脱髓鞘疾病，是年轻人残疾的主要原因之一。B细胞耗竭治疗的成功经验提示B细胞和抗体在MS的发生和进展中起到重要作用，探寻相关免疫调节疗法具有重要科学意义和临床应用价值。<br>　　浆细胞（plasmacells，PCs）及其前体浆母细胞（plasmablasts，PBs）是免疫系统中的关键成分，主要负责合成和分泌抗体，参与体液免疫反应。在MS及其经典动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE）中，浆细胞和浆母细胞通过产生自身抗体参与致病，同时也可通过分泌细胞因子参与调控免疫激活和免疫耐受。因此，调控浆细胞/浆母细胞的分化和功能是MS/EAE的潜在治疗策略。程序性死亡受体-1（programmedcelldeathprotein1，PD-1）是一种免疫抑制性受体，广泛表达于T细胞、B细胞等各类免疫细胞表面。PD-1与其配体PD-L1相结合可以启动下级信号级联，负性调控免疫反应，其功能失调在MS/EAE的发病中发挥重要作用。已有研究表明，PD-L1治疗可以减轻EAE症状，但其具体作用及机制仍待探索。激活PD-1/PD-L1信号通路可调控MS/EAE中浆细胞分化及功能，诱导免疫耐受，目前尚无研究。<br>　　本研究旨在探讨可溶性PD-L1（solubleprogrammedcelldeathligand1，sPD-L1）在EAE中对浆细胞和浆母细胞分化、细胞因子和抗体产生的调控作用，以期为MS的治疗提供新的策略和理论依据。<br>　　研究方法：<br>　　(1)MOG35-55肽段和含灭活结核分支杆菌H37Ra的完全弗氏佐剂混合形成乳化剂，皮下注射于C57BL/6J雌性小鼠背部，随后腹腔注射百日咳毒素（PTX），48小时后再次腹腔注射PTX从而建立小鼠EAE模型。于免疫诱导当天开始每日监测小鼠的临床症状评分，直至发病高峰。开始发病时（免疫诱导第6天）EAE+sPD-L1组小鼠给予sPD-L1连续腹腔注射5天，对于EAE组小鼠，在上述相同时间点给予腹腔注射等体积生理盐水。<br>　　(2)在发病高峰期获取各组小鼠脊髓组织制作石蜡切片，进行苏木精-伊红染色和固蓝染色，观察脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘情况。<br>　　(3)于发病高峰期取小鼠脾脏，制备脾脏单细胞悬液，流式细胞术检测脾脏浆细胞（CD19-CD27hiCD138+)和浆母细胞（CD19+CD27hiCD138+)的比例，并检测浆细胞、浆母细胞中IL-6和IL-10的表达水平。<br>　　(4)于EAE发病高峰期取小鼠外周血，分离血清，酶联免疫吸附法检测血清中IgG和IgM的浓度。<br>　　研究结果：<br>　　(1)给予雌性C57BL/6J小鼠MOG35-55肽段、完全弗氏佐剂和灭活结核分支杆菌H37Ra的混合乳液皮下注射，以及百日咳毒素腹腔注射，成功建立了EAE小鼠模型。<br>　　(2)sPD-L1治疗可以显著降低EAE小鼠的临床症状评分，减少EAE小鼠脊髓炎性细胞浸润，改善EAE小鼠脊髓脱髓鞘情况。<br>　　(3)与正常对照组相比，EAE组小鼠脾脏中浆细胞比例明显升高（P=0.001），EAE+sPD-L1治疗组小鼠脾脏浆细胞比例较EAE组明显降低（P=0.012＜0.05）。正常对照组、EAE组、EAE+sPD-L1治疗组的脾脏浆母细胞比例无显著差异。<br>　　(4)EAE组和EAE+sPD-L1组脾脏浆细胞中表达IL-10的细胞比例均低于正常对照组（EAE组：Plt;0.0001；EAE+sPD-L1组：Plt;0.0001），而EAE组和EAE+sPD-L1组间无显著差异。正常对照组、EAE组、EAE+sPD-L1组脾脏浆细胞中表达IL-6的细胞比例无显著差异，浆母细胞中表达IL-6和IL-10的细胞比例无显著差异。<br>　　(5)与正常对照组相比，EAE组小鼠血清IgM和IgG水平均显著升高（IgM：P=0.01；IgG：P=0.03＜0.05）。与EAE组相比，EAE+sPD-L1组小鼠血清中IgM水平显著下降（P=0.014＜0.05），IgG水平无明显差异。<br>　　结论：<br>　　(1)sPD-L1对EAE小鼠有显著治疗效果，可以改善神经功能损伤，改善脊髓组织炎性细胞浸润和脱髓鞘情况。<br>　　(2)在EAE小鼠体内，sPD-L1治疗可抑制脾脏浆细胞的分化。<br>　　(3)sPD-L1治疗对EAE小鼠脾脏浆细胞和浆母细胞IL-6和IL-10的产生无显著影响。<br>　　(4)sPD-L1治疗可降低EAE小鼠血清中IgM的分泌水平。