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摘要研究背景：<br>　　糖尿病性视网膜病变（diabeticretinopathy，DR）是糖尿病常见的微血管并发症，是工作年龄人群中主要的致盲性眼病。DR的发生和进展主要是由于慢性高血糖导致多种机制的复杂相互作用，从而引起视网膜细胞损伤、视网膜血管通透性异常、闭塞性缺血和新生血管形成。DR患者视网膜新生血管的产生主要与视网膜细胞血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）的异常表达和分泌相关，VEGF的过表达与氧化应激密切相关。视网膜色素上皮（retinalpigmentepithelium，RPE）细胞参与构成血-视网膜屏障，能够产生和维持光感受器细胞间质，分泌VEGF。二氧化铈纳米颗粒可以模拟多种酶活性，可自再生，在生物体内保留时间长，通过表面铈+3和+4价态的相互转化而具有抗氧化、抗炎能力，并且已有研究证明其在年龄相关性黄斑变性中具有抗VEGF能力。铂（platinum，Pt）纳米粒子具有抗氧化及产氧能力，负载在其他纳米材料上时，可以提高复合材料的催化性能。目前临床上DR的治疗方法包括视网膜激光光凝术、抗VEGF药物玻璃体腔注射、玻璃体切除术等，其中抗VEGF药物有半衰期短需频繁注射、多次注射导致并发症风险增加等缺点，需要探索更优化的治疗方向。<br>　　研究目的：<br>　　制备具有模拟超氧化物歧化酶、过氧化氢酶能力的二氧化铈载铂复合纳米材料（CeO2-PEI-PtNPs），在体外建立视网膜色素上皮的高糖损伤模型，检测其在视网膜色素上皮细胞中的抗氧化应激及抗VEGF的能力。<br>　　研究方法：<br>　　1.制备CeO2-PEI-PtNPs：<br>　　通过化学合成方法制备二氧化铈纳米颗粒，在表面包裹聚乙烯亚胺（polyethyleneimine，PEI），并载入铂纳米颗粒，得到CeO2-PEI-PtNPs。<br>　　2.CeO2-PEI-PtNPs表征与性能检测：<br>　　通过透射电子显微镜（transmissionelectronmicroscope，TEM）、X射线衍射（X-raydiffraction，XRD）、傅里叶变换红外分光光度计（fouriertransforminfraredspectroscopy，FTIR）对材料进行表征，通过超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）检测试剂盒、羟自由基检测试剂盒检测材料的性能，溶氧仪测定材料产氧能力，即对H2O2的分解能力。<br>　　3.CeO2-PEI-PtNPs在RPE细胞中的生物相容性、抗氧化应激及抗VEGF能力检测：<br>　　在体外建立小鼠RPE细胞高糖损伤模型，以低糖培养基培养的小鼠RPE细胞作为对照。倒置显微镜下观察不同浓度葡萄糖培养条件下RPE细胞的形态。利用CCK-8检测不同浓度CeO2-PEI-PtNPs干预下的RPE细胞活力。使用异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanateisomer，FITC）标记材料，4'',6-二脒基-2-苯基吲哚（4'',6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）染色后固定细胞，通过荧光显微镜观察不同时间点RPE细胞内的荧光。H2O2诱导细胞损伤后，利用CCK-8检测不同浓度CeO2-PEI-PtNPs干预下的RPE细胞活力。脂多糖诱导RPE细胞氧化应激及炎症反应后，加入CeO2-PEI-PtNPs干预，通过活性氧荧光探针2'',7''-二氯荧光素二乙酸酯（2'',7''-dichlorodihydrofluoresceindiacetate，DCFH-DA）标记细胞内活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS），通过荧光显微镜观察RPE细胞内的荧光。使用小鼠VEGF检测试剂盒，检测低糖及高糖培养条件下RPE细胞分泌VEGF含量，以及不同浓度CeO2-PEI-PtNPs干预后RPE细胞分泌VEGF含量。<br>　　研究结果：<br>　　1.CeO2-PEI-PtNPs具有较好的形貌尺寸，大小均一，CeO2NPs直径约7nm，PtNPs直径约2nm，CeO2-PEI-Pt复合纳米颗粒尺寸小于100nm。<br>　　2.合成的CeO2NPs表面有羧酸基团、CeO2-PEINPs表面基团通过PEI修饰为氨基基团，XRD图谱可见CeO2和Pt的衍射峰。<br>　　3.CeO2-PEI-PtNPsSOD活力随着材料浓度的提高逐渐增加，浓度为200μg/mL时SOD活力最高；CeO2-PEI-PtNPs抑制羟自由基的能力随着材料浓度的提高而增强，浓度为200μg/mL时抑制羟自由基的能力最强；CeO2-PEI-PtNPs产氧速率随着浓度的提高而增加，具有分解H2O2的能力。<br>　　4.5mM葡萄糖浓度下培养的RPE细胞单层贴壁生长，呈扁平不规则多边形，边界清晰，随着葡萄糖浓度的提高，细胞生长形态明显发生改变，结构紊乱，不规则细胞增多，胞体变薄拉长。不同浓度CeO2-PEI-PtNPs干预下，RPE细胞存活率均在80%以上。随着时间延长，细胞摄取实验中RPE细胞内荧光强度逐渐增加。H2O2诱导RPE细胞存活率下降，在CeO2-PEI-PtNPs干预下，细胞存活率随着材料浓度的提高而增加。LPS诱导RPE细胞内ROS荧光染色增加，在CeO2-PEI-PtNPs干预下，RPE细胞内荧光染色减弱。<br>　　5.以5mM葡萄糖浓度培养条件为对照，随着葡萄糖浓度增加，RPE细胞分泌的VEGF呈浓度依赖性升高；高糖组在CeO2-PEI-PtNPs干预下，RPE细胞VEGF分泌显著减少，材料浓度越高，分泌的VEGF越少。<br>　　研究结论：<br>　　1.CeO2-PEI-PtNPs毒性低，生物相容性好，具有模拟SOD及CAT的能力，同时具有产氧能力，在炎症及氧化应激环境下，可以提高细胞存活率，减少ROS含量。<br>　　2.CeO2-PEI-PtNPs能抑制高糖环境下RPE细胞分泌VEGF，帮助RPE细胞抵抗高糖损伤。