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摘要目的：<br>　　胆管癌是一种高侵袭性且致死率极高的恶性肿瘤，由于早期发病隐匿，不容易被发现，导致确诊时往往处于疾病中晚期，错失了胆管癌手术切除的最佳时机。但是手术切除是胆管癌患者唯一可靠的治疗方法，而且胆管癌放化疗效果并不理想。上述综合因素导致胆管癌患者生存时间短、预后差，所以胆管癌的有效诊断和治疗依旧是一个巨大的临床难题，开发出新的高效的胆管癌诊疗手段迫在眉睫。本研究基于蛋白质组学发现了一种新的胆管癌生物标志物，通过临床标本和细胞实验对其进行了充分验证，并且利用该标志物和机器学习方法建立了一个胆管癌诊断模型，实现了对胆管癌的高效诊断。并且对新的生物标志物在胆管癌中的致癌作用机制进行了深入研究，帮助实现针对胆管癌的精准靶向治疗。<br>　　方法：<br>　　集兰州大学第一医院和中国医学科学院肿瘤医院的644例患者（236例胆管癌和408例非胆管癌患者）的胆汁和血液检测数据，将它们分为筛选集、交叉验证集和外部验证集。对筛选集的胆汁和胆管癌细胞上清液进行蛋白质组学分析，联合胆汁和细胞上清的组学数据筛选胆管癌生物标志物，然后在635例临床体液标本和121例术后组织标本以及细胞实验中进行生物标志物的验证。利用机器学习方法在交叉验证集中组建包含胆汁和血清指标的胆管癌诊断模型，并且在完全独立的外部验证集中进行模型的诊断能力验证。利用质粒慢病毒技术研究目标因子对胆管癌细胞生长的影响作用，然后使用RNA-seq技术和细胞实验研究目标因子在胆管癌中的致癌机制，并且最后在动物实验中进行体内验证。<br>　　结果：<br>　　1.筛选并验证胆管癌生物标志物：在5例胆管癌胆汁和4例胆管结石胆汁的蛋白质组学中共筛选出130个上调蛋白和37个下调蛋白，在4株胆管癌细胞和1株正常胆管上皮细胞的上清液蛋白质组学中共筛选出273个上调蛋白和659个下调蛋白，最后联合胆汁和细胞上清组学数据发现了胆管癌生物标志物CLU蛋白。利用临床标本（胆汁和术后组织）和细胞实验（细胞和细胞上清）验证发现胆管癌中的CLU在mRNA和蛋白水平上均高于对照组，而且免疫组织化学染色结果发现CLU与胆管癌患者预后密切相关。<br>　　2.探索CLU的胆管癌诊断能力并组建胆管癌诊断模型：对胆汁CLU和血清CLU的表达量进行预实验分析，结果发现胆汁CLU更适用于胆管癌诊断，而且在包含有376例患者的交叉验证集中发现胆汁CLU具有较好的诊断能力（AUC：0.852；敏感性：73.6%；特异性：90.1%）。然后以胆汁CLU和63项血液指标为基础，利用机器学习方法在交叉验证集中组建了一个包含有7个标志物的诊断模型，该模型具有良好的胆管癌诊断能力（AUC：0.947；敏感性：90.3%；特异性：84.9%），7个标志物分别是CLU、CA19-9、IBIL、GGT、LDL-C、TG和TBA。在完全独立的外部验证集中对该模型进行验证，得到了相似的胆管癌诊断结果（AUC：0.925；敏感性：87.4%；特异性：83.7%）。为了方便该模型的使用，建立了一个专属的胆管癌诊断网页。<br>　　3.探索CLU在胆管癌中的致癌机制：利用质粒慢病毒技术沉默细胞中的CLU基因后发现胆管癌细胞的生长受到了明显的抑制，对沉默CLU后的细胞进行RNA-seq分析，发现CLU与胆管癌细胞凋亡、周期以及致癌通路密切相关，然后利用流式细胞术、Tunel凋亡检测和凋亡相关蛋白等进行验证，发现CLU主要通过PI3K-AKT通路调节胆管癌细胞凋亡，从而影响胆管癌细胞生长，但是CLU并不影响细胞周期。在动物体内实验中得到了相同的结果，即CLU主要通过调节凋亡影响小鼠皮下移植肿瘤的生长。<br>　　结论：<br>　　1.CLU在胆管癌中高表达，并且与胆管癌患者预后密切相关，是一种比较理想的胆管癌生物标志物。<br>　　2.胆汁CLU是一种比较理想的胆管癌诊断标志物，并且以此为基础建立的7-指标组合具有很高的胆管癌诊断价值，本研究也是目前关于胆管癌诊断最大、最全面的研究。<br>　　3.细胞体外实验和小鼠体内实验表明CLU可促进胆管癌的生长，主要通过PI3K-AKT信号通路保护胆管癌细胞防止凋亡，表明CLU有希望成为胆管癌精准靶向治疗的一个有效靶点。