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摘要目的：本研究通过分析不同浓度万古霉素对小鼠颅顶前成骨细胞（MC3T3-E1)的细胞增殖、成骨分化及矿化的影响，从而初步探讨抗生素缓释系统局部释放的不同浓度万古霉素在慢性骨髓炎治疗中对成骨的影响。<br>　　方法：⑴通过细胞复苏、传代及成骨诱导等步骤培养MC3T3-E1细胞，构建体外成骨分化实验模型。⑵用不同浓度万古霉素处理MC3T3-E1细胞，于常规培养第1、3、5、7天通过CCK-8法检测细胞增殖及毒性分级情况，评估不同浓度万古霉素对成骨细胞增殖及毒性的影响。⑶用不同浓度万古霉素处理MC3T3-E1细胞，于常规培养第1、3、7天通过活/死细胞荧光染色法进行染色后在显微镜下观察活死细胞数目的变化，评估不同浓度万古霉素对成骨细胞增殖及存活的影响。⑷用含不同浓度万古霉素的成骨诱导培养液诱导MC3T3-E1细胞进行成骨分化，于成骨诱导培养第7天检测细胞裂解液中的碱性磷酸酶活性；同时于成骨诱导培养第14天进行碱性磷酸酶染色，初步评估不同浓度万古霉素对成骨细胞早期成骨分化的影响；同方法于成骨诱导培养第21天，通过茜素红染色法评估万古霉素对成骨细胞晚期矿化的影响。最后，结合已发表文献研究及临床指南推断出抗生素缓释系统释放的万古霉素局部安全浓度范围。<br>　　结果：⑴CCK-8法检测细胞增殖及毒性评价结果显示高浓度万古霉素处理（2000μg/ml、5000μg/ml）后第3天开始MC3T3-E1细胞的增殖明显受到抑制，结果有极显著性差异（P＜0.01）；而低浓度万古霉素处理组（50μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml）与对照组相比，细胞增殖未见明显抑制，结果无显著性差异（P＞0.05）。低浓度万古霉素处理组（50μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml）细胞毒性范围在0-1级，表示细胞增殖良好，毒性合格；高浓度处理组（2000μg/ml、5000μg/ml）细胞毒性为2级，毒性较大。另外，随着时间的延长，对照组及低浓度处理组（50μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml）的细胞增殖也呈现逐渐升高的趋势，说明细胞在安全浓度范围内是可以正常增殖与生长；但高浓度万古霉素（2000、5000μg/ml）处理时随着时间的延长，细胞增殖会呈现先增高后降低趋势，说明细胞增殖不仅受万古霉素浓度的影响，还会受暴露于万古霉素时间的影响，暴露时间越长细胞毒性越大。⑵活/死细胞荧光染色结果也显示在万古霉素局部安全浓度范围内（0-1000μg/ml），随着时间的延长可观察到MC3T3-E1细胞可以正常增殖和生长，细胞形态未发生明显改变。当万古霉素浓度达到2000μg/ml时发绿色荧光的活细胞数目开始明显下降，细胞形态也发生改变，呈碎片状、圆形或不规则样。⑶检测成骨细胞分化及矿化结果显示，与对照组相比，万古霉素处理组（1000、2000、5000μg/ml）ALP活性降低率分别为8.86%、20.26%、31.86%，说明万古霉素浓度达到1000μg/ml时即开始明显影响MC3T3-E1细胞的ALP活性。而茜素红染色后钙结节数目统计结果显示，相比对照组，高浓度万古霉素处理组（2000、5000μg/ml）钙结节数目明显减少，具有极显著性差异（P＜0.01），而低浓度处理组（50、500、1000μg/ml）钙结节数目无显著性差异（P＞0.05）。<br>　　结论：研究结果表明，抗生素缓释系统中释放的局部万古霉素浓度在一定安全浓度范围内（0-1000μg/ml）对成骨细胞的增殖、存活、成骨分化及矿化影响不明显，毒性较小；可以作为局部抗生素缓释载体中负载的抗生素治疗慢性骨髓炎。但是，现有文献证据还无法去制定或建议局部抗生素缓释系统中具体负载的抗生素剂量。相信后续会有更深层次的研究会探讨抗生素缓释系统中负载的抗生素类型及具体剂量，为制定局部抗生素缓释系统治疗慢性骨髓炎的临床指南提供理论依据。