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摘要阿尔茨海默症（Alzheimer’sdisease，AD）是一种常见的神经退行性疾病，主要特征表现为认知功能和行为能力减退，严重影响患者身体健康和生活质量。因此，研究AD的致病机理以及寻找有效的治疗手段已刻不容缓。大量研究观点认为，AD发病的主要原因是由于β淀粉样蛋白（β-amyloidprotein，Aβ）水平失衡，导致Aβ过度聚集而引发的神经元损伤和凋亡。而β-分泌酶（β-secretase1，BACE1）在Aβ生成过程中起关键作用，并且BACE1调控失常也是AD发病的一个重要因素，因此BACE1成为减少Aβ分泌以及治疗AD的理想药物靶点，也是目前AD药物研发领域研究的重点方向之一。研究显示硫酸乙酰肝素（Heparansulfate，HS）能与BACE1直接结合，且参与了AD的发病过程。因此，本研究将探究HS糖链对BACE1酶切淀粉样前体蛋白（Fulllengthamyloidprecursorprotein，f-APP）的影响，以及调控BACE1表达的机制，这对开发相应AD治疗药物具有重要的理论指导意义。<br>　　本论文主要研究内容及结果如下：<br>　　1.用甲基β-吡喃木糖苷（Methylβ-xylopyranoside，ⅹyloside）抑制过表达APP的人源神经母细胞瘤细胞（SHSY5Y-APP695swe）中内源性HS糖链合成或用肝素酶Ⅲ（HeparinaseⅢ，HepⅢ）降解SHSY5Y-APP695swe内源性HS糖链，探究HS对BACE1的调控作用。结果显示，下调内源性HS糖链水平后，f-APP表达水平无显著变化，但BACE1表达水平降低，并且C99蛋白和Aβ的生成减少。此外，下调HS糖链后，非淀粉样途径中C83片段的产生显著增加。这表明下调SHSY5Y-APP695swe内源性HS糖链可降低f-APP通过淀粉样途径的裂解，但增强了其非淀粉样途径的裂解。<br>　　2.用ⅹyloside及HepⅢ抑制Tg2576小鼠原代神经元细胞中内源性HS糖链合成或降解其内源性HS，探究并验证在原代神经元细胞中，内源性HS糖链是否同样参与BACE1酶切f-APP产生Aβ的过程以及是否对BACE1表达有调控作用。结果显示，下调Tg2576小鼠原代神经元细胞内源性HS糖链后不影响f-APP的表达水平，但降低BACE1蛋白的表达，降低其下游蛋白C99的生成和sAPPβ的分泌水平，最终减少了Aβ的产生。这表明在原代神经元细胞中下调内源性HS糖链同样可减少f-APP通过淀粉样途径的裂解。<br>　　3.用放线菌酮（Cycloheximide，CHX）阻断细胞中蛋白质的合成，检测下调HS糖链水平前后BACE1表达水平的变化。同时利用ⅹyloside抑制SHSY5Y-APP695swe内源性HS糖链合成后，通过实时荧光定量PCR检测f-APP、BACE1、PSEN1、ADAM10（Adisintegrinandmetalloprotease10）、ADAM17（Adisintegrinandmetalloprotease17）等基因的转录水平，探究HS糖链对f-APP代谢途径中相关基因的转录调控作用。结果显示，降低细胞中HS糖链合成不仅可以促进BACE1的降解，而且降低了BACE1和ADAM10的转录水平，但对f-APP，ADAM17的转录水平无显著影响。