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摘要甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤，其中分化型甲状腺癌(Differentiated thyroid cancer, DTC) 占90-95%。一般DTC患者通过手术、选择性放射性碘 (Radioactive iodine, RAI) 治疗、促甲状腺激素 (Thyroid stimulating hormone, TSH) 抑制治疗等综合治疗均可取得良好的疗效。然而，一部分DTC可在自然状态下或治疗过程中会丧失摄碘能力发展为预后较差的碘难治性分化型甲状腺癌(Radioiodine-refractory differentiated thyroid cancer, RAIR-DTC)。而甲状腺未分化癌(Anaplastic thyroid carcinoma, ATC) 是最具侵袭性，预后最差的甲状腺癌分型。ATC癌细胞在逐步失分化的过程中导致碘代谢功能受损，从而RAI治疗对其无效。重新诱导碘代谢基因表达以恢复放射性碘亲和力是该类碘难治性甲状腺癌的重要策略。<br>　　富亮氨酸α2-糖蛋白-1 (Leucine-rich alpha-2-glycoprotein1, LRG1)是富含亮氨酸重复序列 (Leucine-rich repeat, LRR) 蛋白家族的一种分泌型糖蛋白。已有文献报道LRG1与多种肿瘤的增殖、迁移及其血管生成相关，并且与胃癌、结直肠癌等肿瘤的发生、发展及预后关系密切。目前LRG1在甲状腺癌中的研究尚少且存在一定争议，也未见其与摄碘能力关系的报道。钠/碘同向转运体 (Sodium iodide symporter, NIS)是一种已被证实是甲状腺细胞摄碘分子基础的跨膜蛋白。NIS的表达量及其膜靶向功能与甲状腺滤泡细胞吸收和浓缩碘化物的能力密切相关，是RAI治疗成功与否的关键因素。<br>　　目的：<br>　　1、探讨碘难治性分化型甲状腺癌的分子特征；2、探讨 LRG1与碘难治性甲状腺癌的关系，并探索其影响机制。<br>　　方法：<br>　　1、生物信息学分析：回顾性筛选苏州大学附属第二医院甲乳外科2018年6月至2022年7月期间收治的甲状腺全切术后在131I治疗后证实的RAIR-DTC患者11例和非RAIR-DTC患者9例。对这两组患者的石蜡切片进行RNA NGS检测，对所检测的结果进行生物信息分析，找到值得进一步研究的基因 (LRG1)。利用GEPIA数据库对LRG1进行Kaplain-Meier生存分析，探究LRG1与甲状腺癌预后的关系。<br>　　2、临床研究：以NGS测序同样的入组条件筛选2018年6月至2023年7月期间收治的两组患者各15例，利用免疫组化法检测两组患者组织中的LRG1、NIS蛋白表达水平，利用独立样本t检验分析不同组两个蛋白的表达差异并利用Pearson法分析两个蛋白表达相关性。利用单因素分析以及二元logistic回归探讨RAIR-DTC的临床病理特征。利用ROC曲线分析LRG1、NIS对于RAIR-DTC的预测价值。<br>　　3、体外实验研究：<br>　　（1）LRG1表达量与甲状腺癌细胞功能关系的研究<br>　　RT-qPCR、Western Blot及免疫荧光法检测甲状腺癌细胞系中LRG1、NIS的表达水平。将敲低LRG1的siRNA转染至高表达LRG1的甲状腺癌细胞系8305C中；构建LRG1过表达质粒并转染至低表达LRG1的甲状腺癌细胞系BCPAP中：RT-qPCR及Western Blot检测siRNA敲低效率及质粒过表达效率；细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验验证LRG1与甲状腺癌细胞功能的关系。运用γ计数器检测甲状腺癌细胞摄碘能力与LRG1表达量的关系。<br>　　（2）LRG1调控甲状腺癌摄碘能力的机制初探：<br>　　Western Blot法检测LRG1、NIS蛋白以及摄碘相关通路蛋白的关系。发现LRG1与YAP/TAZ轴关系密切，于是我们将YAP siRNA转染至BCPAP细胞系检测其对细胞生物学功能与摄碘能力的改变。<br>　　结果：<br>　　1.运用RNA NGS筛选出前20个最显著差异基因，统筹文献调研结果选择LRG1进行后续研究。利用GEPIA数据库分析：LRG1高表达的甲状腺癌患者总体生存率更好。<br>　　2.免疫组化结果分析后发现RAIR-DTC组织中LRG1蛋白高表达而NIS蛋白低表达，两个蛋白表达无显著相关性。利用单因素分析发现TNM分期是RAIR-DTC的危险因素。利用二元logistic回归分析发现LRG1蛋白高表达、NIS蛋白低表达是RAIR-DTC的独立危险因素。ROC曲线显示联合LRG1蛋白、NIS蛋白对RAIR-DTC有较好的预测价值。<br>　　3. LRG1在人甲状腺乳头状癌细胞株BCPAP中低表达，在人甲状腺未分化癌细胞株8305C中高表达。过表达LRG1质粒转染可以显著提高BCPAP中的LRG1水平。过表达LRG1可以促进BCPAP的增殖、迁移、侵袭，但是会抑制其摄碘能力。siRNA (LRG1-homo-437) 可以显著下调8305C中的LRG1水平。下调LRG1表达可以抑制8305C的增殖、迁移、侵袭，但是会增强其摄碘能力。<br>　　4.在细胞系中敲低LRG1时，NIS蛋白表达增加；过表达LRG1时，NIS蛋白表达下降。LRG1与YAP/TAZ轴关系密切。在BCPAP细胞系，相较于单纯LRG1+组细胞，LRG1+/si-YAP组细胞的迁移侵袭能力都受到了一定抑制，细胞摄碘能力也得到了一定恢复。<br>　　结论：<br>　　（ 1 ） LRG1蛋白高表达、NIS蛋白低表达是RAIR-DTC的独立危险因素；联合LRG1蛋白、NIS蛋白构建的ROC曲线对RAIR-DTC有较好的预测价值。<br>　　（2）LRG1可能调控NIS的表达并且有可能是通过YAP/TAZ通路影响甲状腺癌细胞增殖、侵袭、迁移以及摄碘能力。<br>　　本研究为碘难治性甲状腺癌的治疗提供了一种治疗新思路以及预测指标，具有潜在的临床转化应用前景。