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摘要目的：通过“结扎法+高糖饮食+注射脂多糖（LPS）”3种方法相结合构建SD大鼠实验性牙周炎模型，通过“以切牙为支抗在上颌与第一磨牙间放置正畸拉簧近中移动磨牙”方法构建实验性正畸牙移动模型。以甲状旁腺激素（PTH）为阳性对照，分别用口腔洁方高、中剂量干预模型大鼠，初步探索口腔洁方对牙周炎+正畸牙移动模型的作用及其具体机制。<br>　　方法：<br>　　1.口腔洁方干预实验性牙周炎+正畸牙移动大鼠模型的作用观察：选取36只8周龄雄性大鼠，随机分为6组（6只/组）：空白对照组（NC）、牙周炎模型组（PD）、牙周炎+正畸牙移动模型组（PD+OTM）、高剂量口腔洁方治疗组（KQJ-H）、中剂量口腔洁方治疗组（KQJ-M）和西药对照组（PTH），适应性喂养1周后，对PD组、PD+OTM组、KQJ-H组、KQJ-M组和PTH组通过“结扎法+高糖饮食+注射LPS”3种方法相结合构建SD大鼠上颌双侧第一磨牙的实验性牙周炎模型，4周后验证牙周炎造模是否成功。牙周炎造模2周后，对PD+OTM组、KQJ-H组、KQJ-M组和PTH组通过“利用切牙为支抗在上颌与第一磨牙间放置正畸拉簧近中移动磨牙”方法构建SD大鼠上颌双侧实验性正畸牙移动模型。在正畸牙移动造模2周后，进行不同剂量口腔洁方和PTH药物干预两周，基线后第6周检测上颌双侧第一磨牙以下牙周病相关指标：牙周袋探诊深度（PPD）、牙龈指数（GI）、改良菌斑指数（mPLI）、改良龈沟出血指数（mSBI）。然后注射过量戊巴比妥钠处死大鼠，分离上颌双侧第一磨牙牙周组织，固定后运用Micro-CT对以下骨形态学参数进行分析：颊侧釉牙骨质界（CEJ）与牙槽嵴顶（ABC）之间距离、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁分离度（Tb.Sp）和骨密度（BMD）。制备病理组织切片，行HE染色、TRAP染色检测。<br>　　2.口腔洁方干预实验性牙周炎+正畸牙移动大鼠模型的作用及机制研究：实验造模和分组方式同上。在基线后第4周造模成功后KQJ-H、KQJ-M两组大鼠分别予0.78g/mL、0.39g/mL口腔洁方灌胃，5mL/d，2.5mL/次，一日两次，其他组大鼠同频次等量予0.9%（w/v）生理盐水灌胃。PTH组6只大鼠予PTH（1-34）背部皮下注射给药，40μg/kg/d，一日一次，其他组大鼠同频次等量予0.9%（w/v）生理盐水背部皮下注射。所有给药持续2周后，处死前检测牙周临床相关指标，然后注射过量戊巴比妥钠处死，分离上颌双侧第一磨牙牙周组织，固定后行Micro-CT扫描，制备病理组织切片，行HE染色观察牙周组织病理结构，TRAP染色检测破骨细胞数量。提取组织RNA和蛋白，进行RT-qPCR检测miR-29a-3p表达水平，蛋白免疫印迹（WB）检测Wnt3a、Dickkopf相关蛋白1（Dkk-1）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白表达，ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平。经固定、脱钙后制备病理组织切片，进行免疫组化染色、FISH检测Dkk-1、Wnt3a、TNF-α、骨保护素（OPG）、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）以及miR-29a-3p的定位和表达。<br>　　结果：<br>　　1.所有大鼠一般情况良好，模型组观察到牙周袋形成和牙槽骨吸收，且第一磨牙有不同程度近中移位，提示实验性牙周炎和正畸牙移动模型构建成功。处死前检测牙周病相关指标，结果表明PD组和PD+OTM组PPD、GI、mPLI、mSBI均显著高于NC组（P＜0.05），且PD+OTM上述指标明显高于PD组（P＜0.05）。Micro-CT扫描结果显示，PD组大鼠CEJ-ABC距离、Tb.Sp均显著高于NC组（P＜0.05），而BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BMD等指标则显著低于NC组（P＜0.05）；PD+OTM组大鼠可见第一磨牙不同程度近中移动，与第二磨牙间形成明显间隙，CEJ-ABC距离、Tb.Sp均明显高于PD组和NC组（P＜0.05），而BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BMD等指标则显著低于PD组和NC组（P＜0.05）。HE染色显示，相比NC组正常的组织结构，PD组和PD+OTM组均可见牙周膜间隙重度增宽，牙龈上皮、龈沟上皮和结合上皮形态结构破坏，炎性细胞浸润。TRAP染色结果显示，PD组和PD+OTM组均观察到大量TRAP+多核破骨细胞，与NC组相比破骨细胞数量显著增加（P＜0.05），且PD+OTM组明显高于PD组（P＜0.05）。<br>　　2.KQJ-H、KQJ-M和PTH3个治疗组的牙周病相关指标PPD、GI、mPLI、mSBI和Micro-CT指标CEJ-ABC距离、Tb.Sp与PD+OTM组相比，均有不同程度下降（P＜0.05），而BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BMD等指标则有上升（P＜0.05），且KQJ-H与PTH组相比，各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　HE染色显示，相比PD+OTM组，3个治疗组牙周膜间隙仅轻、中度增宽，牙龈上皮、龈沟上皮和结合上皮形态结构完整或轻度破坏，伴或不伴炎性细胞浸润。TRAP染色结果显示，与PD+OTM组相比，3个治疗组的TRAP+细胞明显减少（P＜0.05），且与PTH组相比，KQJ-H组多核破骨细胞数量差异无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　免疫组化染色结果显示，各指标NC、PD、PD+OTM组间均有显著差异（P＜0.05），与PD+OTM组相比，KQJ-H、KQJ-M和PTH3个治疗组Dkk-1、TNF-α、RANKL和MMP9阳性表达率均有不同程度显著降低（P＜0.05），而Wnt3a、OPG则有不同程度明显升高（P＜0.05），除TNF-α、RANKL外，其余指标KQJ-H和PTH组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　FISH染色和RT-qPCR结果表明，NC、PD、PD+OTM组间均有显著差异（P＜0.05），3个治疗组miR-29a-3p相对荧光强度和表达水平均较PD+OTM组有不同程度升高（P＜0.05），且KQJ-H均明显高于PTH组（P＜0.05）。<br>　　Westernblot结果提示，NC、PD、PD+OTM组间均有显著差异（P＜0.05），3个治疗组Wnt3a蛋白表达量均较PD+OTM组显著降低（P＜0.05），而Dkk-1和TNF-α蛋白表达量则有不同程度升高（P＜0.05），除Wnt3a外，其余两个指标KQJ-H均明显高于PTH组（P＜0.05）。<br>　　ELISA结果显示，NC、PD、PD+OTM组间均有显著差异（P＜0.05），3个治疗组牙周组织TNF?α、IL?1β、IL?6含量较PD+OTM组有不同程度的降低（P＜0.05），KQJ-H与PTH组相比，TNF?α后者显著高于前者（P＜0.05），IL?1β两组间差异无统计学意义（P＞0.05），IL?6前者显著高于后者（P＜0.05）。<br>　　结论：口腔洁方可以减轻实验性牙周炎+正畸牙移动模型大鼠牙周组织的炎症反应，减少牙槽骨的吸收，促进牙周组织成骨效应，从而改善牙周炎状态下的正畸牙移动，其机制可能与miR-29a-3p介导下的Dkk-1/Wnt信号通路以及炎症因子TNF-α有关。