摘要目的:通过构建豚鼠透镜诱导型近视(lens-inducedmyopia,LIM)模型,观察在近视发展过程中睫状肌组织形态的改变,探究视力舒颗粒对LIM豚鼠睫状肌的影响及其确切疗效,为该药物的机制研究和临床应用提供理论依据。<br> 方法:实验分为两个部分。第一部分:将90只3周龄英国三色短毛豚鼠随机分为空白组、模型组、0.01%阿托品组、视力舒低剂量组、视力舒高剂量组。空白组豚鼠不做任何干预措施,其余组豚鼠右眼均佩戴-8.00DS透镜,造模时间分为2周和4周,每个时间点各组分别处死9只豚鼠以进行检测。在造模当天予以药物干预,0.01%阿托品组使用0.01%阿托品滴眼;视力舒低、高剂量组分别给予不同浓度的视力舒颗粒混悬液灌胃。在造模前、造模第2周、4周测量各组豚鼠屈光度和眼轴,造模2周、4周时麻醉处死,通过病理切片观察睫状肌组织结构形态变化。第二部分:实验动物分组及干预措施同第一部分。造模2周、4周时麻醉处死,通过免疫组化学(Immunohistochemistry,IHC)、蛋白免疫印迹(WesternBlot,WB)、实时荧光定量聚合酶链反应(QuantitativeReal-timePCR,qPCR)检测技术观察睫状肌中Na+/K+-ATPase和α-SMA的表达情况。<br> 结果:1.视力舒颗粒对LIM豚鼠屈光度、眼轴及睫状肌形态结构的影响<br> (1)屈光度:①与自身对照眼相比,在造模第2周、4周,除空白组外的其余各组右眼近视屈光度均高于左眼(P<0.05)。②在不同组别之间,与空白组右眼近视屈光度相比,模型组显著增高(P<0.01);与模型组相比,视力舒高剂量组和0.01%阿托品组显著降低(P<0.05),视力舒低剂量组屈光度有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05);在造模第4周,视力舒高剂量组与0.01%阿托品组的屈光度相比差异无统计学意义(P>0.05)。③在不同时间点上,各组豚鼠的右眼与左眼近视屈光度均显示出了不同程度的增加,表现为4周>2周>0周。<br> (2)眼轴:①与自身对照眼相比,在造模第2周、4周,除空白组外的其余各组右眼眼轴长度均高于左眼(P<0.05)。②在不同组别之间,与空白组右眼眼轴相比,模型组显著增长(P<0.001);与模型组相比,视力舒高剂量组和0.01%阿托品组显著降低(P<0.01),视力舒低剂量组眼轴长度有所减少,但差异无统计学意义(P>0.05);在造模第2周、4周,视力舒高剂量组与0.01%阿托品组相比眼轴长度差异无统计学意义(P>0.05)。③在不同时间点上,各组豚鼠的右眼与左眼眼轴长度均显示出了不同程度的增长,表现为4周>2周>0周。<br> (3)睫状肌形态结构:病理切片观察到空白组豚鼠的睫状肌纤维排列整齐、结构完整清晰,且无明显断裂;经过透镜诱导后,睫状肌纤维明显断裂,结构混乱,排列松散;视力舒低剂量组豚鼠的睫状肌纤维断裂,排序较为混乱;视力舒高剂量组和0.01%阿托品组睫状肌纤维存在断裂,但其排列和结构保持较好的有序性,其中,0.01%阿托品组豚鼠的睫状肌组织结构更为完整。<br> 2.视力舒颗粒对LIM豚鼠睫状肌中Na+/K+-ATPase和α-SMA表达的影响<br> (1)Na+/K+-ATPase的表达水平:在造模第2周、4周,与空白组相比,模型组豚鼠睫状肌中Na+/K+-ATPase表达水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,视力舒高剂量组和0.01%阿托品组Na+/K+-ATPase表达水平均显著升高(P<0.05),视力舒低剂量组Na+/K+-ATPase蛋白表达量与模型组相比明显升高(P<0.05),AOD值和mRNA也有所升高,但差异不显著(P>0.05);视力舒高剂量组与0.01%阿托品组的Na+/K+-ATPaseAOD值和mRNA相比无显著差异(P>0.05)。<br> (2)α-SMA的表达水平:①在造模第2周,与空白组相比,模型组豚鼠睫状肌中α-SMA表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组相比,视力舒高剂量组和0.01%阿托品组α-SMA表达水平均显著降低(P<0.05),视力舒低剂量组表达水平有所下降,但无统计学差异(P>0.05);视力舒高剂量组与0.01%阿托品组的α-SMA表达水平相比无显著差异(P>0.05)。②在造模第4周,与空白组相比,模型组豚鼠睫状肌中α-SMA表达水平显著下降(P<0.01),与模型组相比,视力舒高剂量组和0.01%阿托品组α-SMA的表达显著升高(P<0.05),视力舒低剂量组与模型组相比α-SMA表达有所上升,但无统计学差异(P>0.05);视力舒高剂量组与0.01%阿托品组的α-SMA表达水平相比无显著差异(P>0.05)。<br> 结论:1.3周龄豚鼠连续佩戴-8.00DS透镜4周可成功复制LIM模型,视力舒颗粒在一定程度上能够抑制LIM豚鼠近视屈光度增加,减缓眼轴延长。<br> 2.LIM豚鼠睫状肌组织形态受到破坏,视力舒颗粒能够在一定程度调控Na+/K+-ATPase和α-SMA的表达,改善睫状肌的形态结构,有助于恢复睫状肌的生理功能。
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