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摘要目的：心肌肥大是心脏为应对损伤或负荷增加时的一种代偿性、适应性反应，初期对机体有利，但在长期的病理刺激下，过甚的心肌肥大会使心功能由代偿走向失代偿，导致心力衰竭，甚至心血管疾病猝死。故延缓、减轻心肌肥大对防治心力衰竭和减少心血管疾病猝死的发生至关重要。但目前，心肌肥大的发病机制尚未完全阐明，为临床治疗和法医鉴定工作带来困难。课题组前期研究表明肥厚型心肌病患者心肌组织中血小板反应蛋白 3（THBS3）高表达，但意义不明；进一步通过生物信息学方法筛选得到调控 THBS3 的 microRNA（miR-363-5p），两者均为本研究重点关注的内容。因此，本研究旨在探讨 miR-363-5p能否靶向调控 THBS3对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大有所影响。<br>　　方法：C57BL/6 小鼠行横主动脉缩窄（TAC）术以模拟心室肥厚体内模型，人来源心肌细胞系（AC16）给予 1μmol/L AngⅡ以复制心肌肥大体外模型。通过超声心动图检测小鼠心室壁厚度和心功能，苏木素-伊红（HE）染色观察心肌细胞形态及大小，蛋白质免疫印迹法检测胚胎期基因（ANP、BNP、β-MHC）和血小板反应蛋白3（THBS3）的蛋白表达水平，实时荧光定量PCR检测miR-363-5p和THBS3 mRNA 表达水平，Alexa Fluor 488 标记鬼笔环肽染色观察细胞骨架，Image J 量化心肌细胞面积大小。合成 miR-363-5p 模拟物（ mimics ）和 miR-363-5p 抑制剂（inhibitor）转染AC16细胞以用于miR-363-5p过表达和抑制表达，构建THBS3过表达质粒以用于 THBS3内源性过表达。双荧光素酶报告基因实验验证 miR-363-5p与THBS3之间的靶向关系。<br>　　结果：TAC术后的模型组小鼠左室后壁厚度显著大于假手术组，心功能明显低于假手术组；模型组小鼠心肌细胞面积和心肌组织中胚胎期基因的蛋白相对表达量明显大于、高于假手术组，以上结果提示成功建立心肌肥厚体内模型。经 AngⅡ诱导的模型组 AC16细胞面积和胚胎期基因的蛋白相对表达量明显大于、高于对照组，提示成功复制心肌肥大体外模型。MiR-363-5p 在体内、体外模型组中的表达水平均明显低于假手术组和对照组，提示 miR-363-5p 在调节心肌肥大的发生、发展中具有关键作用。过表达 miR-363-5p 可明显减小心肌细胞面积和降低胚胎期基因的蛋白表达，抑制 miR-363-5p表达则呈相反趋势，提示 miR-363-5p可延缓心肌肥大的进展。双荧光素酶报告基因实验表明，共转染 miR-363-5p mimic 和 THBS3 野生型序列的工具细胞，其荧光素酶活性明显低于共转染mimics阴性对照和THBS3野生型，而转染突变型序列的两组细胞荧光素酶活性比较，差异则无统计学意义；此外，过表达 miR-363-5p 可使 THBS3 mRNA 和蛋白相对表达量均明显降低，提示miR-363-5p靶向结合且负向调控 THBS3表达。与仅转染 miR-363-5p mimics相比，同时过表达THBS3和miR-363-5p可使心肌细胞面积增大并上调胚胎期基因的蛋白表达，提示 THBS3作为 miR-363-5p下游调控因子部分消除 miR-363-5p对心肌肥大的减轻作用。<br>　　结论：利用 TAC 术和 AngⅡ复制心肌肥大体内、体外模型，探究 miR-363-5p对心肌肥大的作用机制，实验结果表明 miR-363-5p 在心肌肥大模型中表达降低，并对AngⅡ诱导的心肌肥大具有延缓作用，这一作用可被其下游靶蛋白THBS3有效逆转。本研究的发现可为临床防治心力衰竭与降低心血管疾病猝死的发生提供有力的理论指导。