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摘要目的：中风是全世界致残和死亡的第二大原因，而在中风急性期的治疗非常有限。本研究拟通过生物信息学方法探讨 microRNA（miRNA）在急性缺血性脑卒中（AIS）的调控作用，寻找AIS的潜在治疗靶点并探索其作用机制。<br>　　方法：（1）从GEO数据库中下载GSE95204和GSE16561两个芯片数据，使用R语言软件包识别对照组与中风组、中风组与rt-PA组差异表达的miRNAs，以及对照组与中风组的差异表达基因(DEGs)。使用 Targetcsan 网站预测差异表达 miRNAs 的靶基因，与DEGs交叉后通过Cytoscape软件构建miRNA-靶基因调控网络。此外，我们利用基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析了m-miRNA靶向DEGs的潜在作用机制；（2）建立小鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）模拟AIS，检测由生物信息学方法筛选出的差异miRNAs的表达，确定目的miRNA；通过荧光原位杂交技术检测目的miRNA在脑组织中的定位；（3）小鼠侧脑室注射目的micrONTM agomir（模拟物）、micrOFFTM antagomir（抑制剂）和 micrONTM NC（阴性对照）后建立MCAO模型，评估急性期神经功能缺损，检测脑梗死体积、脑组织病理损伤和神经细胞凋亡坏死情况；建立小鼠海马神经元细胞系（HT22）氧糖剥离和再复氧模型（OGD/R），检测 OGD/R 细胞中目的 miRNA 的表达水平；在细胞内转染目的miRNA mimic（模拟物）、miRNA inhibitor（抑制剂）和 miRNA nc（阴性对照），检测神经元细胞存活和死亡情况，通过 TUNEL 和流式细胞术检测细胞凋亡；（4）在MCAO模型中检测相关靶基因的表达，通过 TargetScan 网站预测目的 miRNA的下游靶基因，用双荧光素酶报告基因及转染 miRNA 进行验证，获得目的靶基因；在HT22细胞中使用siRNA敲低目的靶基因，以探讨目的靶基因是否调控OGD/R造成的神经元损伤过程；最后，使用慢病毒载体过表达目的靶基因，再转染目的miRNA mimic，检测目的靶基因的过表达是否逆转了miRNA的细胞保护作用，并验证生物信息学方法获得的通路是否为可能的作用机制。<br>　　结果：（1）在GSE95204芯片数据中获得对照组与AIS组、溶栓组与未溶栓组差异表达的 miRNAs，并得到 9 个重叠的 m-miRNAs；在 GSE16561 芯片数据中鉴定出AIS后的527个差异表达基因（DEGs）；通过TargetScan、miRDB和microRNA三种公开数据库预测m-miRNAs的潜在靶基因，与差异表达的mRNAs取交集，得到5个m-miRNAs靶向37个重叠靶基因，KEGG富集分析显示这些基因可能富集在mTOR信号通路上；（2）构建小鼠 MCAO 模型，造模后小鼠存在中度以上神经功能缺损，脑梗死体积在 30-40%之间，脑组织严重受损，神经细胞凋亡发生；miR-99b-5p 在MCAO后表达减少，荧光原位杂交结果显示miR-99b-5p与神经元共定位；（3）侧脑室注射miR-99b-5p agomir 上调其表达，显著改善了上述脑损伤，增加了神经元细胞存活，减少了细胞凋亡；而侧脑室注射 miR-99b-5p antagomir 下调其表达后部分加重了脑缺血再灌注损伤；在 HT22 细胞中转染 miR-99b-5p mimic 和 inhibitor 获得同样的结果；（4）FKBP5表达在MCAO模型小鼠中显著增高，双荧光素酶报告基因结果显示野生型 FKBP5 可使荧光活性降低，突变型 FKBP5 可恢复降低的荧光活性，且转染miR-99b-5p mimic也可使FKBP5蛋白表达降低，抑制miR-99b-5p后可使 FKBP5蛋白表达增加；在OGD/R模型中单独使用siRNA抑制FKBP5，检测到细胞凋亡减少，存活增多；同时给予 miR-99b-5p mimic和 FKBP5 的过表达慢病毒载体后，miR-99b-5p mimic 的细胞保护作用被取消；最后，在 OGD/R 模型中发现 AKT 和 mTOR磷酸化水平下降，miR-99b-5p mimic上调恢复 AKT 和 mTOR 磷酸化水平，FKBP5 过表达逆转了这种作用，导致AKT和mTOR磷酸化水平下降。<br>　　结论：本研究发现，miR-99b-5p在MCAO小鼠和OGD/R神经元细胞中表达下调，上调miR-99b-5p可改善MCAO小鼠脑组织损伤和细胞凋亡坏死，同时减少OGD/R神经元细胞凋亡，下调miR-99b-5p可加重脑损伤和细胞凋亡。FKBP5是miR-99b-5p的下游靶基因，在MCAO小鼠和OGD/R神经元细胞中表达上调，可逆转miR-99b-5p上调后的保护作用。本实验结果提示miR-99b-5p可以作为急性缺血性脑卒中的治疗靶点，miR-99b-5p靶向FKBP5通过AKT/mTOR信号轴发挥调控作用。