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摘要本文从以下两部分进行阐述：<br>　　第一部分 基于 CDI 与 4-（二甲基氨基）-苯甲胺的衍生化策略联合LC-MS/MS检测血清中11种游离脂肪酸<br>　　目的：建立一种高灵敏度的检测人血样本中棕榈油酸、油酸、亚油酸、二十碳五烯酸、二十碳烯酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、ω3-二十二碳五烯酸、ω6-二十二碳五烯酸、γ-亚麻酸、α-亚麻酸11种游离脂肪酸LC-MS/MS的衍生方法。用于监测人血液中重要的游离脂肪酸水平，为健康评估、疾病诊断以及合理膳食提供指导依据。<br>　　方法：微量的血清样本经蛋白沉淀、液-液萃取，并采用N,N''-羰基咪唑（CDI）与4-（二甲基氨基）-苯甲胺结合的新型衍生化技术对提取的游离脂肪酸及其稳定同位素内标进行衍生化预处理，通过LC-MS/MS进行检测，同位素内标法定量分析。同时采用响应面分析法对新型衍生技术的反应条件进行优化和分析，确定最佳反应条件。采用 Waters ACOUITY UPLC?HSS T3 色谱柱（1.8 μm, 2.1 × 50 mm），流动相由溶剂 A（0.05%甲酸水），溶剂 B（0.05%甲酸乙腈）平衡组成，流速为 0.6 mL/min，柱温 55℃，进样量 1.0 μL；采用电喷雾电离源（ESI），正离子多反应监测（MRM）方式进行检测，分析时间为 8.5 min。<br>　　结果：基于CDI与4-（二甲基氨基）-苯甲胺的衍生化技术衍生血清中游离脂肪酸的最佳衍生条件为：取 1.5 mg/mL 的 N,N''-羰基咪唑乙腈溶液200 μL于含有脂肪酸残余物的离心管中涡旋30 s，25℃振荡孵育25 min。反应结束后，再加入 1.2 mg/mL 的 4-（二甲基氨基）-苯甲胺乙腈溶液 200 μL，涡旋混匀 30 s，70℃振荡孵育 35 min。在最优的液相条件和质谱条件下11种游离脂肪酸（棕榈油酸、油酸、亚油酸、二十碳五烯酸、二十碳烯酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、ω3-二十二碳五烯酸、ω6-二十二碳五烯酸、γ-亚麻酸、α-亚麻酸）检出限在 3.0 - 14.0 ng/mL；定量限在 9.0 - 45.0 ng/mL；日内精密度在 0.7 - 9.1%，日间精密度在 3.7 - 9.5%，该方法准确度和精密度良好。<br>　　结论：建立一种简单快速、高灵敏度的高效液相色谱-质谱联用的新方法，能够在 8.5 min 内完成对血清中 11 种关键游离脂肪酸检测，用于监测人血液中重要的游离脂肪酸水平，为健康评估、疾病诊断以及合理膳食提供指导依据。<br>　　第二部分 基于 3-NPH 低温衍生化技术结合 LC-MS/MS 检测人血清、尿液以及粪便中6种挥发性脂肪酸<br>　　目的：建立一种基于3-硝基苯肼（3-NPH）衍生试剂的高灵敏度同时测定人粪便、尿液以及血清样本中乙酸、丙酸、戊酸、异戊酸、丁酸以及异丁酸6种挥发性脂肪酸的LC-MS/MS的衍生方法。用于监测人体中挥发性脂肪酸水平，可反映肠道菌群情况、监测肠道营养情况、评估肠道功能以及监测营养补充剂和药物的作用并提供指导依据。<br>　　方法：利用水提取法提取粪便中的挥发性脂肪酸，采用5倍体积的冰乙腈溶液对粪便提取液、尿液以及血清进行沉淀稀释，涡旋混匀 2 min，再加入 150 μL 超纯水，离心后，取上清液加入 3-硝基苯肼（3-NPH）甲醇溶液和N-（3-二甲基氨基丙基）-N''-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）含4%吡啶的甲醇溶液 4℃衍生反应 1 h，反应完成后加入 0.01%甲酸水溶液，过 0.22 μm 尼龙滤膜，上机检测。考察了衍生反应时间、温度、反应物浓度对衍生化产物峰面积的影响并优化反应条件。分析采用HPLC-MS/MS系统进行，色谱分离在 Waters ACOUITY UPLC?BEH C8 色谱柱（1.7 μm, 2.1 × 100 mm）上进行，柱温为 50℃。流动相由溶剂 A（0.01%甲酸水），溶剂B（0.01%甲酸乙腈），采用ESI离子源，多反应监测负离子模式进行检测。<br>　　结果：衍生反应的最佳条件为：1 mg/mL 3-NPH 甲醇溶液；200 mg/mL EDC甲醇溶液（含4%吡啶）作为催化剂；反应温度为4℃；反应时间为60 min。10 min 内便能实现对 6 种挥发性脂肪酸的色谱分离。6 种脂肪酸的峰面积与内标峰面积比值与浓度有良好的线性关系（r＞0.995），同时日内、日间精密度良好（RSD小于15%），稳定同位素内标法有效的消除了基质效应的影响，提取回收率在 80 - 120%之间。<br>　　结论：3-NPH衍生化方法对于挥发性脂肪酸反应条件温和、操作简单，有效解决了脂肪酸在检测处理过程中挥发性强的问题；HPLC-MS/MS方法准确、简易、可重复，可用于人血清、尿液以及粪便中挥发性脂肪酸的含量测定。