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摘要目的：<br>　　支气管哮喘发病率逐年上升，气道炎症是其重要的病理生理特征。泛素特异性肽酶7（Ubiquitin-specific protease 7，USP7）是一种去泛素化酶，参与炎症反应相关蛋白的调控。课题组前期研究发现USP7通过介导哮喘的气道重塑参与了哮喘的发生，本研究进一步结合人群临床研究及哮喘细胞模型探讨USP7如何通过对NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（Nucleotide-binding domain and leucine-rich repeat protein3，NLRP3）及铁死亡相关通路的调节作用参与哮喘气道炎症的发生发展。<br>　　方法：<br>　　1. 采集健康儿童和哮喘患儿静脉血2 ml，分离外周血单个核细胞并提取总RNA，将总RNA逆转录为cDNA。qPCR法检测两组人群单个核细胞中USP7、NLRP3、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4，GPX4)、溶质载体家族3成员2 （Solute Carrier Family 7 Member 11，SLC7A11）mRNA表达水平。<br>　　2. 用不同浓度（0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml）屋尘螨刺激BEAS-2B细胞，提取细胞总蛋白和RNA。通过western blot、qPCR检测USP7蛋白和mRNA水平的表达，qPCR检测IL-1β（Interleukin-1β）以及IL-18（Interleukin-18）等细胞因子mRNA水平的表达，CCK8检测细胞活性，确定屋尘螨最佳刺激浓度。<br>　　3. 将BEAS-2B细胞分为三组①屋尘螨+空载质粒组：使用屋尘螨刺激BEAS-2B细胞24 h后转染空载质粒；②屋尘螨+USP7敲低组：在使用屋尘螨刺激BEAS-2B细胞基础上siRNA敲低USP7；③屋尘螨+USP7过表达组：在使用屋尘螨刺激BEAS-2B基础上使用质粒过表达USP7。收取细胞，通过western blot、qPCR检测各组NLRP3和铁死亡相关通路蛋白及细胞因子的表达；CCK8检测各组细胞活性。<br>　　4. 将BEAS-2B 细胞分为二组①屋尘螨+USP7 敲低组：在使用屋尘螨刺激BEAS-2B细胞基础上siRNA敲低USP7；②屋尘螨+USP7敲低+NLRP3抑制组：在使用屋尘螨刺激BEAS-2B细胞24 h后，siRNA敲低USP7同时给药MCC950（NLRP3抑制剂）。收取细胞，通过western blot、qPCR检测各组铁死亡相关通路蛋白及细胞因子的表达；CCK8检测各组细胞活性。<br>　　结果：<br>　　1. 哮喘患儿外周血单个核细胞中USP7、NLRP3 mRNA表达水平较健康儿童升高，而GPX4、SLC7A11 mRNA表达水平较健康儿童降低。<br>　　2. 加入屋尘螨刺激的BEAS-2B细胞，在10μg/ml屋尘螨刺激时USP7在蛋白水平、IL-18mRNA水平表达最高，细胞活性最低。<br>　　3. 屋尘螨+USP7敲低组较对照组（屋尘螨+空载质粒组）USP7、NLRP3及其炎症通路相关蛋白（Caspase-1（Cysteinyl aspartate specific proteinase-1）、GSDMD （Gasdermin D））表达量降低，铁死亡通路相关蛋白（GPX4、SLC7A11）表达升高，P53表达降低，通路相关细胞因子IL-1β、IL-18、TNF-α（Tumor necrosis factor-α） mRNA表达量降低，细胞活性明显高于对照组；屋尘螨+USP7过表达组与对照组相比结果则与屋尘螨+USP7敲低组相反。<br>　　4. 实验组（屋尘螨+USP7敲低+NLRP3抑制组） NLRP3相关通路相关蛋白（Caspase-1、GSDMD）表达量低于对照组（屋尘螨+USP7敲低组），铁死亡通路相关蛋白（GPX4、SLC7A11）表达量高于对照组， IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA表达低于对照组，细胞活性明显高于对照组。<br>　　结论：<br>　　1. USP7、NLRP3、铁死亡相关通路蛋白（GPX4、SLC7A11）在哮喘中有一定作用。<br>　　2. 干扰USP7可抑制炎症反应，使NLRP3及铁死亡通路被抑制及相关细胞因子表达降低；过表达USP7加重了屋尘螨刺激人支气管上皮细胞使细胞产生炎症反应，促使NLRP3及铁死亡通路被激活及相关细胞因子升高。<br>　　3. 干扰USP7同时抑制NLRP3较单独干扰USP7更能抑制铁死亡通路及相关细胞因子表达，抑制炎症反应。