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摘要目的：我国目前关于ACAD9基因相关线粒体复合体I缺乏症20型（mitochondrial complex I deficiency, nuclear type 20, MC1DN20）的病例报道少见，更鲜有对其突变功能及致病机制的相关研究。本课题组前期在对心肌病患儿研究中，发现1例罕见的ACAD9基因突变患儿，基因检测结果显示该患儿携带ACAD9基因c.2T＞A（p.M1K）和c.1168G＞A（p.A390T）复合杂合突变，其中c.2T＞A（p.M1K）为新突变，既往文献中未见报道。为了阐明这两种突变的致病分子机制，我们进行了生物信息学分析和细胞水平的初步功能验证，探究了分子伴侣类药物4-PBA及VX-809对突变蛋白的纠正作用，以期为临床新药的开发提供新思路。<br>　　方法：1、收集该例MC1DN20患儿的临床特征和基因资料，长期随访患儿情况和预后，并对相关ACAD9突变进行生信分析。2、提取患儿外周血DNA，应用实时荧光定量 PCR（real time quantitative PCR, RT-qPCR）检测mtDNA 的拷贝数，以阐释ACAD9基因突变对患者mtDNA拷贝数的影响。3、公司外购ACAD9基因野生型、MIK和A390T两种突变型质粒，提取质粒并测序成功后转染HEK293T细胞，进行 Western Blot 实验检测突变对蛋白表达的影响，并在细胞转染24小时后加入分子伴侣类药物4-PBA、VX-809，探究药物对蛋白表达的纠正作用。<br>　　结果：1.通过全外显子组测序和Sanger测序技术，发现患儿携带ACAD9基因c.2T＞A（p.M1K）和c.1168G＞A（p.A390T）复合杂合突变，分别来自母方和父方。患儿临床表现为混合型心肌病（心肌肥厚伴心肌收缩功能下降）、顽固性高乳酸血症、发育稍落后、运动不耐受和肌力下降。2. 外周血 mtDNA 拷贝数分析显示患儿mtDNA拷贝数较正常对照组显著降低（P＜0.001）。3、体外细胞实验表明MIK和A390T两种突变均使蛋白表达明显下调（分别为P＜0.01、P＜0.001）；4-PBA能使野生型、MIK和A390T突变型蛋白表达明显上调（分别为P＜0.01、P＜0.0001、P＜0.0001），VX-809能使野生型和MIK突变型蛋白表达明显上调（均为P＜0.0001），但对A390T突变型蛋白表达无明显影响（P＞0.0 5）。<br>　　结论：1、我们发现了1例罕见的ACAD9基因突变相关的MC1DN20，患儿主要临床表现为以心肌肥厚为主的混合型心肌病，给予患儿“鸡尾酒”疗法并长期随访患儿预后，目前患儿心功能维持在正常水平，但心肌肥厚症状未见明显好转，仍有顽固性高乳酸血症及运动不耐受等症状。2、患儿外周血mtDNA拷贝数水平较正常对照组明显下降，表明患儿存在mtDNA损伤和氧化磷酸化功能障碍。3、在HEK293T细胞中，MIK和A390T两种突变均使ACAD9蛋白表达明显下调，推测这两种错义突变可能使蛋白错误折叠，导致蛋白表达下降，而小分子药物4-PBA和VX-809能不同程度地上调突变蛋白表达，我们的研究可能给未来新药开发提供了新的方向和实验基础。