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摘要抗生素相关性腹泻（Antibiotic-associateddiarrhea，AAD）是抗生素治疗期间常见的副作用。抗生素治疗引起的肠道菌群失调可导致艰难梭菌过度生长，引起广泛的胃肠道疾病。临床上常用益生菌缓解AAD的症状，如减少患者的腹泻频次，改善大便稀便等，而黄芪多糖（Astragaluspolysaccharides，APS）可通过改善代谢物水平，调节肠道菌群等方面缓解AAD症状，但是二者联合使用的功效尚不清楚，因此，本研究旨在探讨益生菌和黄芪多糖联合使用改善和治疗抗生素相关性腹泻的作用机制。具体研究内容及结果如下：<br>　　首先，基于艰难梭菌生长抑制作用筛选改善AAD的乳酸菌。采用琼脂扩散法和共培养法筛选出能够抑制艰难梭菌生长的菌株，结合药敏试验结果筛选出实验菌株，利用API50CH鉴定系统、16SrDNA和pheS基因序列比对等方法对得到的实验菌株进行鉴定。筛菌结果表明，CCA10-8，CH2-14和ELF051显著抑制难梭菌生长，抑菌率分别为20.83%，21.69%和23.68%。药敏试验结果显示，菌株ELF051对抗生素中等敏感，因此选菌株ELF051作为实验菌株，经API50CH、16SrDNA和pheS序列比对，菌株ELF051被鉴定为植物乳植杆菌（Lactiplantibacillusplantarum）。<br>　　其次，研究植物乳植杆菌ELF051联合黄芪多糖改善AAD的作用机制。采用CellCountingKit-8（CCK-8）检测植物乳植杆菌ELF051和黄芪多糖对Caco-2细胞的毒性作用，利用阿莫西林诱导Caco-2细胞构建细胞损伤模型，ELISA法分析Caco-2细胞中通透性因子、免疫因子和炎症因子的变化。进一步体内实验，小鼠随机分为5组：对照组、模型组、ELF051组、APS组和ELF051+APS组，除对照组外，小鼠通过连续7天灌胃混合抗生素（500mg/kg阿莫西林+400mg/kg克林霉素+350mg/kg链霉素）构建AAD小鼠模型，各实验组分别利用盐水、ELF051或/和APS干预14天后，检测小鼠体重、粪便含水量和脏器指数。采用PAS染色、阿利新蓝染色和HE染色观察结肠病理变化。ELISA法检测结肠组织和血清中细胞因子。采用Westernblot法探讨L.plantarumELF051和APS联合治疗对AAD小鼠紧密连接蛋白、TGF-β1/Smad通路和炎症通路的影响。采用气相色谱-质谱联用技术检测小鼠盲肠内容物中短链脂肪酸的含量。采用16SrRNA肠道菌群测序分析小鼠肠道微生物群的变化。细胞毒性结果表明，L.plantarumELF051和APS的浓度分别为MOI=10和12.5μg/mL。ELISA结果表明，与模型组相比，ELF051组、APS组和ELF051+APS组显著降低了二胺氧化酶（Diamineoxidase，DAO）、D-乳酸（D-lacticacid，D-LA）、白细胞介素17A（Interleukin17A，IL-17A）、肿瘤坏死因子α（Tumornecrosisfactoralpha，TNF-α）和白细胞介素1β（Interleukin1β，IL-1β）的水平，显著升高免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG，IgG）的水平，联合治疗组比单独治疗组更有优势。细胞实验表明L.plantarumELF051和APS联合治疗起到保护Caco-2细胞损伤的作用。动物实验表明，与模型组相比，L.plantarumELF051和APS联合治疗后显著改善了小鼠的腹泻症状，小鼠体重升高，粪便含水量逐渐下降。胸腺指数上升，脾脏指数下降，盲肠指数也恢复正常水平。与模型组相比，PAS染色和阿利新蓝染色结果显示联合治疗组中杯状细胞数和黏液面积占比显著升高。HE染色表明联合治疗组结肠组织中炎症细胞减少，水肿现象减轻，松散排列的肠腺结构变得紧密排列。脏器指数和病理切片显示联合治疗比单独治疗效果好。ELISA结果显示，ELF051组、APS组和ELF051+APS组均降低了DAO、D-LA、脂多糖（Lipolyaccharides，LPS）、转化生长因子β1（Transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1）、IL-17A、白细胞介素4（Interleukin4，IL-4）、TNF-α、IL-1β和艰难梭菌毒素A（ClostridiumdifficiletoxinA，CDT-A）的水平，同时升高分泌型免疫球蛋白A（SecretoryimmunoglobulinA，sIgA）、IgG、γ干扰素（Gammainterferon，IFN-γ）和白细胞介素10（Interleukin10，IL-10）的水平，但联合给药组比单独治疗组更好。WesternBlot结果显示，联合治疗能够提高Occludin、Claudin-1、ZO-1和MUC-2蛋白的表达，同时能够通过TGF-β1/Smad信号通路修复AAD引发的肠道损伤；联合治疗通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路缓解AAD小鼠的炎症反应。肠道微生物高通量测序结果显示，联合治疗显著改善了小鼠肠道菌群的结构和相对丰度，Lactobacillus、Allobaculum和Bifidobacterium的丰度增加，Bacteroides、Blautia和Coprococcus的丰度降低，同时联合治疗还增加了小鼠盲肠内容物中短链脂肪酸的含量。<br>　　综上，本研究筛选获得一株能抑制艰难梭菌生长的菌株，植物乳植杆菌（L.plantarum）ELF051。L.plantarumELF051和APS联合使用可缓解AAD模型动物的症状，可能与TJ蛋白、TGF-β1/Smad信号通路、TLR4/MyD88/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB炎症信号通路有关。L.plantarumELF051和APS联合使用对调节AAD小鼠SCFAs和肠道菌群的起到重要作用。体外实验和体内实验均表明，L.plantarumELF051和APS联合使用对AAD的治疗效果优于L.plantarumELF051和APS单独使用。