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摘要大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性菌，主要寄生于人和动物的肠道内。大肠杆菌为条件致病菌，可侵入生物体中的消化系统、神经系统、泌尿系统和血液，引起腹泻性胃肠炎，甚至导致脑膜炎。近年来，大肠杆菌导致的疾病在家禽养殖业中的发病率及病死率持续增高，造成了巨大的经济损失。随着多重耐药大肠杆菌在全球范围内的快速传播，开发新型抗菌药物迫在眉睫。长白山自然保护区是整个欧亚大陆保存最完整的生态系统，复杂多样的生态环境蕴藏着极其丰富的微生物资源。本研究从长白山土壤环境中筛选出一株贝莱斯芽孢杆菌FS-3，其对多重耐药大肠杆菌具有良好的拮抗活性，经过逐级分离纯化鉴定后得到分子量为463.2Da的细菌素PFS-3，并对其稳定性、安全性以及抗菌机制展开研究。主要实验内容如下：<br>　　针对长白山土壤环境中分离出的530株菌株，通过初筛、复筛得到了一株对多重耐药大肠杆菌有良好拮抗活性的菌株 FS-3，通过菌落形态观察、革兰氏染色以及 16S rDNA 测序比对，鉴定该拮抗菌为贝莱斯芽孢杆菌，对菌株FS-3进行全基因组测序分析，结果显示其基因组全长为 3575679 bp，含有 12 个次级代谢产物基因簇。确定了菌株 FS-3 的最佳发酵条件为初始pH为7、接种量1.5%、培养时间48h、培养温度37℃、培养转速180rpm/min、装液量 300 mL，确定了盐酸沉降的 pH 值为 2。<br>　　从菌株FS-3的发酵上清液中通过液液传质、正向硅胶柱、薄层层析制备型硅胶板、制备型高效液相色谱逐步分离纯化，分离得到细菌素 PFS-3，通过 LC-MS/MS 鉴定细菌素PFS-3分子量为463.2Da。细菌素PFS-3对大部分革兰氏阴性菌均有良好的抗菌活性，且细菌素PFS-3具有良好的热稳定性、酸碱稳定性以及有机试剂稳定性。<br>　　细菌素 PFS-3 的安全性和治疗效果评估结果显示，细菌素 PFS-3 在 256 μg/mL 浓度下的细胞毒性低于10%，溶血活性低于2%。经过细菌素PFS-3治疗后的大蜡螟感染模型和小鼠腹膜炎模型存活率显著提高，通过膜通透性实验、ROS累积量测定以及竞争性抑制实验分析结果显示，细菌素PFS-3对多重耐药大肠杆菌的抗菌机制主要为细菌素PFS-3可与大肠杆菌外膜的心磷脂结合，进而通过破坏细胞外膜起到杀菌作用。