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摘要痘病毒（Poxvirus）是目前已知基因组最大、最复杂且宿主范围最广的病毒科之一，其中正痘病毒属中的猴痘病毒，能够导致人兽共患病，且流行性强、社会危害严重。猴痘病毒（Monkeypoxvirus，MPXV）感染临床表现大部分与天花病毒感染相似，近年来猴痘疫情频发，且目前仍无特效针对药物，有研究表明接种天花疫苗对预防猴痘的效果约为85%。但是我国在上世纪80年代初停止了常规天花疫苗的计划免疫，40岁以下人群对天花病毒普遍没有免疫力。一方面近两年来猴痘的世界流行趋势警示我们应加强防范正痘病毒造成的安全隐患；另一方面由于部分国家实验室仍保有天花病毒样本，所以仍不能忽视天花病毒被用作生物武器的可能。我国所使用的天花疫苗为天坛株痘苗病毒（Vaccinia Virus Tiantan，VTT），在消灭天花过程中发挥了不可替代的重要作用，但仍存在一定安全隐患。<br>　　研究表明VTT复制非必需基因编码许多免疫调节基因，毒力基因和宿主范围基因，这些基因缺失会导致毒力的相对下降，因此构建多毒力相关基因缺失型VTT在理论上既可一定程度保留VTT免疫原性又可降低其安全隐患。因此本研究利用前期构建的一株5段毒力或宿主范围基因缺失型痘苗病毒TTVC5作为研究目标，确定TTVC5的免疫程序、免疫原性和攻毒保护效果。<br>　　本实验首先选取三种常用实验鼠BALB/c、C57BL/6J和棉鼠，通过对比研究鼻黏膜攻毒后，各实验小鼠的临床体征、体重变化率及组织病毒滴度，确定合适的小鼠攻毒模型，为后续研究TTVC5的免疫性和攻毒保护效果奠定基础。随后用TTVC5分别对小鼠进行一次、二次、三次免疫，在终次免疫后28天和免疫后1年通过检测免疫小鼠的特异性抗体、中和抗体水平，同时利用流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞和骨髓树突状细胞亚群分化情况，来确定TTVC5的最适免疫程序及免疫持续时间。最终通过滴鼻攻毒VTT检测免疫小鼠的体重变化率和肺组织的病毒滴度，明确其攻毒保护效果。<br>　　结果表明，BALB/c小鼠攻毒模型稳定可靠，攻毒反应明显，具体表现为小鼠咳嗽、精神沉郁、采食量下降，体重下降，且攻毒后9d以内均能在肺组织中检测到高水平的具有感染能力的病毒，该模型可用于评价TTVC5的免疫原性。免疫后小鼠血清抗体水平及脾淋巴细胞和骨髓树突状细胞亚群分化检测结果表明TTVC5能够诱导BALB/c小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫应答。攻毒保护结果表明TTVC5免疫对VTT攻毒具有良好的保护作用且保护持续时间至少为1年，具体表现为小鼠体重变化率降低及组织病毒残留减少。