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摘要MicroRNAs（miRNAs）是一类短链非编码RNA，研究表明miRNA是临床肿瘤实验室诊断潜在的新型生物标志物。精准检测特定miRNA对临床诊断，疾病风险判断等有十分重要的意义。然而，鉴于miRNA的序列长度短，表达水平低，以及序列同源性高等特征，精准检测miRNA面临着巨大的挑战。因此，迫切需要研究出一种灵敏特异的miRNA检测新方法。<br>　　熵驱动催化（Entropy-driven catalysis，EDC）作为一种无酶等温扩增技术，因其固有的简单性和可靠性在miRNA检测中受到广泛关注。然而，传统的EDC是单输出模式，信号放大的效率有限。因此，本研究提出了一种新型的EDC双输出模式，首先将其与DNAzyme级联，构建了一种熵驱动催化双端DNAzyme （ Entropy-driven catalysis dual end DNAzyme，EDC-DED）传感策略。该方法检测miRNA-21的线性范围为10 pM~1 nM，检测限低至2 pM，与传统的EDC单输出模式级联DNAzyme所构建的熵驱动催化单端DNAzyme （ Entropy-driven catalysis single end DNAzyme，EDC-SED）策略相比，表现出更好的信号放大效率和更高的检测灵敏度。同时，该方法具有优越的检测特异性和重复性，且在稀释血清样本回收实验中的回收率为97.26%~102.75%。<br>　　随后，为了证明新型EDC双输出模式与其他扩增技术级联的通用性，本研究将其与杂交链式反应（Hybridization chain reaction，HCR）级联，构建了一种熵驱动催化双杂交链式反应（Entropy-driven catalysis dual hybridization chain reaction ， EDC-DH ）传感策略。该策略检测miRNA-21的线性范围为10 pM~5 nM，检测限低至8 pM，相较于基于传统EDC单输出模式级联HCR所构建的熵驱动催化单杂交链式反应（Entropy-driven catalysis single hybridization chain reaction，EDC-SH）策略，表现出更佳的放大效率。同样，该方法的检测特异性和重复性性能表现优秀，且在稀释血清样本回收实验中的回收率为95.32%~101.41%。<br>　　综上，本研究基于新型EDC双输出模式分别级联DNAzyme和HCR成功构建了两种灵敏特异且简单快捷检测miRNA-21的新方法，具有良好的分析性能以及在稀释血清样本中检测miRNA的能力。此外，本方法可通过改变核酸序列与其他扩增技术级联，具有较强的通用性和临床应用前景。