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摘要基因调控技术正迅速发展，并展现出巨大的潜力，尤其是在医学和遗传学工程领域。因此，发展能够精准控制蛋白质表达的基因调控技术变得尤为重要。目前多种蛋白质表达调控的方法，包括转录调控系统Tet-on或Tet-off ， RNA稳定性调控系统RNAi和arRNA，蛋白稳定性调控系统SMASh、DD和PROTAC技术。但系统泄露、药物毒性或调控复杂等缺点分别影响了各调控系统的应用。最近，一种基于选择性RNA剪接的药物调控系统Xon，可实现精确控制蛋白质翻译，为临床研究提供新型工具。但Xon系统的片段较大且存在一定的表达泄漏，阻碍其广泛应用。<br>　　本文对miniXon系统进行多维度优化，主要包括以下几个方面：首先减小miniXon系统的可变剪接内含子至445 bp，在不影响系统功能的情况下进一步缩小了系统的体积；对药物结合序列TAGAGTAAGCC进行多轮突变筛选，得到调控效率更高、背景表达更低的突变体C9；筛选出最佳调控启动子UBC。结合以上优化策略最终开发出了体积更小、背景表达更低的小分子药物诱导剪接开关系统。此外，在调控区和目标蛋白之间插入2A肽能够确保POI的精准定位，从而保障蛋白正确行使功能。我们将此系统命名为miniXon2G。体外实验证实miniXon2G对EGFP、Luciferase、BDNF、OCT4以及基因编辑器等各类型蛋白都能实现更低背景的调控。体内实验证实miniXon2G可调控EGFP在小鼠肝脏中的表达以及EPO在血液中的浓度。最后，将miniXon2G敲入到内源性基因GAPDH位点，由内源性基因和小分子药物共同控制蛋白质的表达，实现快速和反复的蛋白质调控。<br>　　总之，miniXon2G的成功构建，实现了Xon系统的微型化，并降低了系统的背景表达且不影响蛋白功能，能够广泛应用于多种蛋白质的调控，适用于任何需要精细控制的生物学场景，为蛋白功能研究及基因治疗研究提供了一个新颖的研究工具。